[發明專利]一種從轉基因牛乳中純化重組人乳鐵蛋白的方法有效
| 申請號： | 200710102035.6 | 申請日： | 2007-04-30 |
| 公開（公告）號： | CN101117351A | 公開（公告）日： | 2008-02-06 |
| 發明（設計）人： | 李寧;湯波;楊鵬華;王建武 | 申請（專利權）人： | 北京濟普霖生物技術有限公司;李寧 |
| 主分類號： | C07K1/18 | 分類號： | C07K1/18;C07K1/34;C07K14/79 |
| 代理公司： | 北京君智知識產權代理事務所 | 代理人： | 向華 |
| 地址： | 100094北京市海淀*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 轉基因 牛乳 純化 重組 鐵蛋白 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種從轉基因牛乳中純化重組人乳鐵蛋白的方法，其特征在于它包括如下步驟：
(1)制備乳清：將轉基因牛乳在4℃下以轉數4500rpm離心15min去除乳脂，然后將乳樣pH值調至3.8-4.6，脫脂乳與1M?HCl的體積比為25∶1；待酪蛋白沉淀后再將pH值調至7.5，乳清與1MNaOH的體積比為25∶1，這樣去除酪蛋白，得到備用乳清；
(2)用偶聯了磺酸基的瓊脂糖凝膠陽離子交換色譜進行純化，并用0.4-1M?NaCl、20mM?Na3PO4梯度洗脫，收集合并同一峰值的洗脫液；
(3)對洗脫液進行超濾或透析處理，制得高純度的重組人乳鐵蛋白。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)中所用緩沖液Na3PO4的pH是7.5。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)中得到兩個洗脫峰P1和P2，分別是在0.6M?NaCl和0.7M?NaCl被洗脫。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)中超濾的操作為：先將洗脫液經5KD的超濾管5000rpm、15min離心濃縮，然后加雙蒸水恢復至原體積，再經超濾管5000rpm、15min離心濃縮。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于得到的重組人乳鐵蛋白可在-55℃冷凍干燥48h，然后于4℃下保存。
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