[發(fā)明專利]用于細胞培養(yǎng)的無動物蛋白質培養(yǎng)基

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710101905.8
• 申請日: 2003-07-08
• 公開（公告）號: CN101058800A
• 公開（公告）日: 2007-10-24
• 發(fā)明（設計）人: M·賴特;W·蒙德特;L·格里爾伯格;B·克勞斯
• 申請（專利權）人: 巴克斯特國際有限公司;巴克斯特健康護理股份有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N5/06;C12N5/10
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 權陸軍;韋欣華

本申請為2005年3月8日提交的03821326.5號中國專利申請的 分案申請。

??????????????????????發(fā)明領域

本發(fā)明涉及包含大豆水解產物和酵母水解產物的組合物的無動 物蛋白質細胞培養(yǎng)基。本發(fā)明也涉及無動物蛋白質培養(yǎng)方法，其中可 在不含動物蛋白質的條件下培養(yǎng)、增殖和傳代細胞。這些方法在培養(yǎng) 細胞，如重組細胞或用病毒感染的細胞中是有用的，且可用于生產經 過細胞培養(yǎng)所得的生物制品。

??????????????????????發(fā)明背景

對于細胞的培養(yǎng)，特別是真核細胞，更特別是哺乳動物細胞，常 需要使用特殊的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基提供營養(yǎng)物質和為細胞有效生長和 生產目的蛋白質或病毒所必需的生長營養(yǎng)物質。細胞培養(yǎng)基配方已經 補充有大量的添加物，包括不確定的組分，如胎牛血清(FCS)、幾 種動物來源的蛋白質和/或牛來源的蛋白質水解產物。

一般而言，血清或血清來源的物質，如清蛋白、轉鐵蛋白或胰島 素，可能含有會污染培養(yǎng)物和由培養(yǎng)物獲得的生物制品的多余的介 質。此外，必須檢測人血清來源的添加物的所有已知的病毒，包括能 通過血清傳遞的肝炎和HIV。而且，牛血清和牛血清來源的產物，例 如胰蛋白酶，有承受BSE污染的危險。另外，所有血清來源的產物可 能被未知的介質污染。細胞培養(yǎng)中，在來源于人或其它動物源的血清 或蛋白質添加物的情況下，特別是如果細胞用于生產施用于人的藥劑 或疫苗存在許多問題(例如，不同批次的質量和成分變化，以及存在 受支原體、病毒或BSE因子污染的危險)。

因此，為提供有效的宿主系統(tǒng)和不需要血清或其它動物蛋白質化 合物的培養(yǎng)條件，已經做了許多嘗試。簡單的無血清培養(yǎng)基一般包括 基礎培養(yǎng)基、維生素、氨基酸、有機和無機鹽，以及使培養(yǎng)基變?yōu)闋I 養(yǎng)復雜化的可能的附加成分。然而，這種培養(yǎng)基經常是營養(yǎng)不足的， 且必須補充動物來源的蛋白質補充物或用于細胞培養(yǎng)的重組的蛋白 質如胰島素、胰島素樣生長因子或其它生長因子。

為避免在無血清細胞培養(yǎng)基中使用動物蛋白質補充物，已經做了 幾種嘗試以提供完全沒有蛋白質的細胞培養(yǎng)基。

Cinatl等人，Cell?Biology?International?17：885-895(1993) 公開了一種特別用于在聚乙烯醇縮甲醛(PVF)培養(yǎng)表面上使VERO細 胞連續(xù)增殖的培養(yǎng)基(PFK-1)的開發(fā)。

WO?96/15231公開了由合成的極限必需培養(yǎng)基和酵母提取物組成 的無血清培養(yǎng)基用于增殖脊椎動物細胞和病毒的生產方法。

在WO?98/15614中公開了一種由包含水稻肽和酵母提取物或酶解 產物的基礎細胞培養(yǎng)基，和/或植物脂質組成的培養(yǎng)基配方用于動物 細胞的生長。

在WO?01/23527中公開了一種包含純化的大豆水解產物的培養(yǎng)基 用于培養(yǎng)重組細胞。

WO?00/03000公開了一種包含大豆水解產物和酵母提取物的培養(yǎng) 基，但也需要存在重組形式的動物蛋白質，如生長因子。

為有效生產生物制品，如病毒或重組蛋白質，達到最佳的細胞密 度以獲得最大的產物產量是重要的。

因此，目前的需求在于增加細胞的生長、代謝活性和密度，以及 提供完全沒有動物蛋白質的理想的細胞培養(yǎng)基用于生產生物制品，如 用作人的藥物或疫苗。此外，如果培養(yǎng)基中不存在動物蛋白質，則下 游加工，例如來自培養(yǎng)基中的所需產物的純化可以是更加經濟和省時 的。另外，實施本發(fā)明可避免不必要的免疫原性動物蛋白質可能誘導 的有害免疫學反應。

??????????????????????發(fā)明概述