[發明專利]核糖核酸及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 200710099981.X
• 申請日: 2007-06-01
• 公開（公告）號: CN101058595A
• 公開（公告）日: 2007-10-24
• 發明（設計）人: 孫德軍;霍英;李夏;李秉安;禹學軍
• 申請（專利權）人: 吉林敖東藥業集團延吉股份有限公司
• 主分類號: C07H21/02
• 分類號: C07H21/02;C07H1/08;A61K31/7105;A61P37/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢

1.核糖核酸的制備方法，包括如下步驟：

1)提取原液的制備

將動物胰腺小塊絞碎后移入膠體磨，加入提取緩沖液進行研磨，得到提取原液；所述提取緩沖液為0.01～0.10mol/L?Tris-乙酸緩沖液，pH4～8；

2)核糖核酸的提取

提取原液加入0.2～10倍體積飽和酚液體的上層水相，和0.2～10倍體積的飽和酚液體的下層酚相，加熱到40～80℃，恒溫30～180分鐘；然后，在4～10℃下離心，收集上清液；所述飽和酚液體是將苯酚融化后，加入等體積的步驟1)所述提取緩沖液，攪拌均勻后得到的；

上清液加入0.5～2倍體積的氯仿-異戊醇溶液，搖勻5～30分鐘，在4～10℃下離心，收集上清液；上清液加入0.2～2倍體積氯仿-異戊醇，搖勻后在4～10℃離心，收集含核糖核酸的上層上清液，所述氯仿-異戊醇溶液中氯仿與異戊醇的體積比為10～50∶1；上清液加入0.1～1體積助沉淀緩沖液，再加入2～6倍體積95％乙醇，搖勻，4℃放置過夜，在4～10℃下離心，收集得到核糖核酸沉淀；助沉淀緩沖液為1-5mol/L乙酸鈉溶液，pH為3-6。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述動物胰腺小塊在絞碎前，還要去除非胰腺組織。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述核糖核酸沉淀還以溶解緩沖液溶解，加乙醇至乙醇終濃度為50～85％，在4～10℃離心；然后，以70-80％乙醇洗滌，并在4～10℃下離心；所述溶解緩沖液為0.5-1M?NaCl溶于0.025-0.075MTris-HCl緩沖液中，pH9.5。

4.根據權利要求1或2或3所述的制備方法，其特征在于：所述離心的加速度為2000～10000g。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于：所述離心的加速度為4000g。