[發明專利]一種DNA疫苗真核表達載體及其在制備基因疫苗中的應用

無效

• 申請號: 200710099887.4
• 申請日: 2007-05-31
• 公開（公告）號: CN101096680A
• 公開（公告）日: 2008-01-02
• 發明（設計）人: 于繼云;閻瑾琦;賈銳;王浩;張亮;劉寧
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79;C12N15/62;C12N15/12;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 魯兵

1、一種DNA疫苗真核表達載體，是在pVAX1載體骨架中添加內部核糖體進入位點編碼序列得到的重組pVAX1真核表達載體。

2、根據權利要求1所述的DNA疫苗真核表達載體，其特征在于：在所述DNA疫苗真核表達載體中的內部核糖體進入位點編碼序列的兩端還添加有一種或多種稀有限制性內切酶識別位點；所述稀有限制性內切酶包括EcoR?V、Cla?I、BstB?I、Pvu?IPsi?I、BssH?II、Swa?I、Pac?I、Nsi?I和Xho?I。

3、根據權利要求2所述的DNA疫苗真核表達載體，其特征在于：所述DNA疫苗真核表達載體為pVAX1-IRES。

4、權利要求1-3任一項所述的DNA疫苗真核表達載體在制備基因疫苗中的應用。

5、根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述基因疫苗為抗腫瘤、抗流感、抗艾滋病、抗病毒性肝炎、抗結核、抗狂犬病或抗瘧疾的基因疫苗。

6、根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述抗腫瘤基因疫苗的活性成分為在權利要求1-3任一項所述的DNA疫苗真核表達載體的載體骨架中核糖體進入位點編碼序列的上游含有Survivin-2B自氨基端第5-28位和第80-121位氨基酸殘基編碼序列構成的融合基因，以及人和猴的絨毛膜促性腺激素β鏈的核心片段CTP37區域編碼序列構成的融合基因的重組真核表達載體。

7、根據權利要求6所述的應用，其特征在于：所述Survivin-2B的自氨基端第5-28位氨基酸殘基的編碼序列和自氨基端第80-121位氨基酸殘基的編碼序列通過連接臂“nG”連接，其中，n為K、R、C、Q、G或N；所述人和猴的絨毛膜促性腺激素β鏈的核心片段CTP37區域編碼序列通過連接臂“nG”連接，其中，n為K、R、C、Q、G或N。

8、根據權利要求6所述的應用，其特征在于：所述抗腫瘤基因疫苗的真核表達載體的載體骨架中內部核糖體進入位點編碼序列的上游還連接有人Igκ鏈前導信號肽編碼序列和/或人IgG-Fc段編碼序列和/或糖基磷脂酰肌醇錨定信號肽編碼序列。

9、根據權利要求6或7或8所述的應用，其特征在于：所述抗腫瘤基因疫苗的真核表達載體的載體骨架中內部核糖體進入位點編碼序列的下游還連接有人GM-CSF和/或B7.1共刺激分子編碼序列，以及白細胞介素、干擾素和/或腫瘤壞死因子的編碼序列。

10、根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述含有Survivin-2B自氨基端第5-28位和第80-121位氨基酸殘基編碼序列構成的融合基因，以及人和猴絨毛膜促性腺激素β鏈的核心片段CTP37區域編碼序列構成的融合基因的重組真核表達載體重組真核表達載體為pVAX1-2PAG或pVAX1-2PAG-Fc-GPI或pVAX1-2PFcGB。