[發明專利]一個苦瓜籽核糖體失活蛋白及其編碼基因與應用

無效

• 申請號: 200710099486.9
• 申請日: 2007-05-22
• 公開（公告）號: CN101070342A
• 公開（公告）日: 2007-11-14
• 發明（設計）人: 孫紅琰;周滿祥;申云飛
• 申請（專利權）人: 山西康寶生物制品股份有限公司;周滿祥;孫紅琰
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/29;A61K38/16;A61P35/00;A61P31/12
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 魯兵

技術領域

本發明涉及植物蛋白及其編碼基因與應用，特別是涉及一個苦瓜籽核糖體失活蛋白及其編碼基因與其在制備抗腫瘤和/或病毒感染，特別是腫瘤靶向以及抗HIV和肝炎病毒感染的藥物中的應用。

背景技術

核糖體失活蛋白(ribosome-inactivating?protein，RIP)是廣泛存在于植物界的一類毒蛋白，是真核生物蛋白合成的抑制劑。它能夠作用于哺乳動物核糖體大亞基上的28S?rRNA，并產生脫腺嘌呤作用，從而破壞核糖體的結構，抑制蛋白質的翻譯；同時RIP還參與細胞凋亡的調節。

根據RIP一級結構的不同，可將其分成兩類：I型和II型。I型RIP由一條肽鏈組成；II型RIP由兩條多肽鏈組成，分別稱為A鏈和B鏈，兩條鏈通過二硫鍵相連。A鏈和I型RIP都具有RNA?N-糖苷酶活性，能使核糖體失活。天花粉蛋白、美洲商陸蛋白、苦瓜毒素蛋白和苦瓜籽核糖體失活蛋白是I型RIP的典型代表，II型RIP主要包括蓖麻毒蛋白、相思子蛋白和香樟毒蛋白等。從結構和遺傳特點上看，II型RIP可能是由I型RIP進化而來的。

I型RIP特別適合做細胞毒性治療藥物的彈頭部分，即可將RIP連接到靶向性試劑(如單克隆抗體或是腫瘤抗原配體等)上，利用這種靶向性試劑可將RIP帶到體內某一特定種類的細胞(如腫瘤細胞)內，選擇性地殺死這種細胞，因而具有較高的療效和較低的毒性。例如，利用二硫鍵將靶向性試劑和毒素相連，在體內二硫鍵被還原，釋放出毒素從而產生細胞內毒性；另一策略是將RIP基因和靶向性模塊融合表達，從而產生靶向性毒素蛋白。

苦瓜中含有多種核糖體失活蛋白，如α-苦瓜素、β-苦瓜素和MAP30等，這些蛋白成分已被證明是良好的抗腫瘤、抗病毒活性物質，因而引起了人們的廣泛關注，但目前，獲得苦瓜籽核糖體失活蛋白的方法主要依賴于天然提取，其缺點在于對原材料的依賴性強，得率低，不利于進一步制備免疫毒素，而克隆核糖體失活蛋白的基因不僅可以比較容易地獲得活性較高核糖體失活蛋白，而且可以有效地進行多種重組免疫毒素的制備。

發明內容

本發明的目的是提供一個苦瓜籽核糖體失活蛋白及其編碼基因。

本發明所提供的苦瓜籽核糖體失活蛋白，名稱為α-Momorcharin，來源于葫蘆科植物苦瓜(Momordica?charantia)，是下述氨基酸殘基序列之一：

1)序列表中的SEQ?ID?NO：1；

2)將序列表中SEQ?ID?NO：1的氨基酸殘基序列經過一至十個氨基酸殘基的取代、缺失或添加具有抑制細胞內核糖體蛋白合成活性的蛋白質。

序列表中的SEQ?ID?NO：1由286個氨基酸殘基組成，自氨基端(N端)第1-23位氨基酸殘基為信號肽，自氨基端第24-286位氨基酸殘基為苦瓜籽核糖體失活蛋白，RNA?N-糖苷酶的功能區主要集中在自氨基端第24-269位氨基酸殘基。

編碼所述苦瓜籽核糖體失活蛋白的基因(α-Momorcharin)，是下述核苷酸序列之一：

1)序列表中SEQ?ID?NO：2的DNA序列；

2)編碼序列表中SEQ?ID?NO：1的DNA序列；

3)與序列表中SEQ?ID?NO：2限定的DNA序列具有90％以上同源性且具有抑制細胞內核糖體蛋白合成活性的核苷酸序列；

4)在高嚴謹條件下可與序列表中SEQ?ID?NO：2限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。

所述高嚴謹條件為在0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃條件下雜交并洗膜。

序列表中的SEQ?ID?NO：2由861個堿基組成，其編碼序列為5’端第1-861位堿基，編碼具有序列表中SEQ?ID?NO：1的氨基酸殘基序列的蛋白質，其中，自5’端第1-69位堿基編碼信號肽，自5’端第70-861位堿基編碼苦瓜籽核糖體失活蛋白。

在本發明中，苦瓜籽核糖體失活蛋白α-Momorcharin包括含有或不含有起始甲硫氨酸(蛋氨酸)的α-Momorcharin。

本發明還提供了所述苦瓜籽核糖體失活蛋白α-Momorcharin的保守性變異多肽、片段、類似物或其衍生物，以及編碼這些多肽的多核苷酸。