[發(fā)明專利]利用逆向基因工程技術開發(fā)蛋白質疫苗與禽流感疫苗的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710098226.X
• 申請日: 2007-04-13
• 公開（公告）號: CN101284130A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發(fā)明（設計）人: 廖朝;章修綱;黃金凱
• 申請（專利權）人: 生寶生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61K39/00;A61P31/16;C12N15/31;C12N15/44;C12N15/63;C12P19/34
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 周長興

1、一種蛋白質疫苗或新型病毒疫苗株的制備方法，包括：

(a)取得一標的抗原蛋白質至少一抗原決定位勝肽的胺基酸序列，并對應轉碼出該勝肽的野生型核酸序列；

(b)將該抗原決定位勝肽的野生型核酸序列，改質為于一宿主細胞中可辨識，編碼有該抗原決定位勝肽的一合成型核酸序列；

(c)合成該合成型核酸序列的復數個引子，該等引子為與該合成型核酸序列具部分片段相同或互補的5-80個核酸序列，且該等引子中，正向引子的3’端與反向引子的3’端有5-10個互補的核酸序列；

(d)利用該等引子，于體外合成該合成型核酸；

(e)將該合成型核酸結合一帶有結合與移位功能的核酸序列，與一羧基終端核酸序列的質體，形成一合成質體；

(f)將該合成質體轉形入該宿主細胞，以生產該合成型核酸所編碼的該抗原決定位勝肽；以及

(g)收集并純化該抗原決定位勝肽。

2、如權利要求1所述的制備方法，其中，該抗原決定位勝肽的胺基酸序列為非自然存在的序列。

3、如權利要求1所述的制備方法，其中，該抗原決定位勝肽為該標的抗原蛋白質結構的親水部位。

4、如權利要求1所述的制備方法，其中，該抗原決定位勝肽為該標的抗原蛋白質結構的疏水部位。

5、如權利要求1所述的制備方法，其中，該宿主細胞為微生物細胞、植物細胞或動物細胞。

6、如權利要求1所述的制備方法，其中，該宿主細胞為大腸桿菌細胞或酵母菌細胞。

7、如權利要求1所述的制備方法，其中，該標的抗原蛋白質的野生型核酸序列與該合成型核酸序列編碼出同一勝肽。

8、如權利要求1所述的制備方法，其中，該合成型核酸是以聚合酶連鎖反應(polymerase?chain?reaction，PCR)方法進行體外合成。

9、如權利要求1所述的制備方法，其中，該結合與移位功能的核酸序列來自假單胞菌屬外毒素(pseudomonas?exotoxin)的第一部位(domain?I)與第二部位(domain?II)。

10、如權利要求1所述的制備方法，其中，該標的抗原基因可崁入疫苗株相似基因的等位區(qū)利用逆向遺傳學及類似流感病毒八質體系統(tǒng)技術產生一種對抗新型病原的疫苗株。

11、如權利要求9所述的制備方法，其中，該假單胞菌屬外毒素的第一部位是配體部位(ligand)。

12、如權利要求11所述的制備方法，其中，該配體部位與一標的細胞的接受體結合。

13、如權利要求12所述的制備方法，其中，該標的細胞是至少一選自以下細胞所組成的群組：T細胞、B細胞、樹突細胞、單核細胞以及巨噬細胞。

14、如權利要求12所述的制備方法，其中，該接受體是至少一選自以下接受體所組成的群組：TGF受體、IL2受體、IL4受體、IL6受體、1GF1受體、CD4受體、IL18受體、IL12受體、EGF受體、LDL受體、α2巨球蛋白受體、熱休克蛋白。

15、如權利要求1所述的制備方法，其中，該羧基終端部分的核酸序列來自假單胞菌屬外毒素的一部分。

16、如權利要求1所述的制備方法，其中，該羧基終端部分包括KDEL的胺基酸序列或對應的核酸序列。

17、一種抑制禽類流行性感冒病毒(Avian?Influenza?virus)的蛋白質疫苗，其結構包括：

一禽類流行性感冒病毒蛋白質的抗原決定位勝肽；

一具有結合與移位功能的勝肽；以及

一羧基終端勝肽。

18、如權利要求17所述的蛋白質疫苗，其中，該編碼有禽類流行性感冒病毒蛋白質的抗原決定位勝肽是人工合成。

19、如權利要求17所述的蛋白質疫苗，其中，該禽類流行性感冒病毒是正黏液病毒科H5N1(orthomyxoviridae?H5N1)。

20、如權利要求17所述的蛋白質疫苗，其中，該禽類流行性感冒病毒蛋白質的抗原決定位的核酸序列經過改質。