[發(fā)明專利]一種重組牛O型口蹄疫病毒融合蛋白疫苗

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710098100.2
• 申請日: 2007-04-28
• 公開（公告）號: CN101293098A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王麗穎;賈春澍;王華;金香蘭;楊明;王華穎;曹昭;于永利
• 申請（專利權(quán)）人: 北京迪威華宇生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: A61K39/135
• 分類號: A61K39/135;C12N15/42;A61P31/14
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地涉及基因工程重組蛋白疫苗，特別是涉及一種預(yù)防動物口蹄疫病毒感染的重組口蹄疫病毒融合蛋白疫苗及其制備方法。

背景技術(shù)

口蹄疫(Foot?and?mouth?disease，F(xiàn)MD)是一種主要發(fā)生于野生和家養(yǎng)的牛，羊，豬等偶蹄類動物的急性全身性的高度傳染性的疾病，口蹄疫病毒(Foot-and-mouth?disease?virus，F(xiàn)MDV)是引起該病的病原體。FMDV傳播方式主要包括消化道、呼吸道、皮膚和粘膜。動物的感染率幾乎達100％，動物感染后體溫升高到40～41℃，狀態(tài)低迷。1～2天后，口腔出現(xiàn)水泡，同時或稍后，趾間、蹄冠的柔軟皮膚上也發(fā)生水泡。動物在患病期間肉和奶的生產(chǎn)停止、病后肉和奶產(chǎn)量長期減少以及種用價值喪失也可造成較大的損失。由于FMDV對相關(guān)農(nóng)、畜牧業(yè)有較大的經(jīng)濟影響，預(yù)防和治療口蹄疫一直是全球關(guān)注的問題。

口蹄疫病毒屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)口瘡病毒屬(Aphthovirus)，是偶蹄類動物高度傳染性疾病口蹄疫的病原體?？谔阋卟《景ㄆ邆€血清型：A型、O型、C型、Asia?1、SAT1、SAT2、SAT3，各血清型之間基因組高度變異并且無交叉反應(yīng)(Margarita?Sáiz，et?al.2002)。

FMDV感染動物后，主要激發(fā)特異性的體液免疫應(yīng)答。體液免疫保護機體免于同類抗原的再感染(J.S.Sallt，1993)。血清中中和抗體的水平與保護作用密切相關(guān)。感染或免疫FMDV后很快就可以檢測出血清中的中和抗體。感染初期(3-4天)IgM首先提高，隨后IgG開始提高，是感染后2周內(nèi)主要的中和抗體(MargaritaSáiz，et?al.2002)。FMDV的感染或免疫也可以激發(fā)T細胞的免疫反應(yīng)。豬和牛的體內(nèi)實驗都證明：B細胞激活和抗體的產(chǎn)生常常伴隨著CD4+T細胞介導(dǎo)的淋巴增生，這些輔助性的T細胞可以識別FMDV結(jié)構(gòu)蛋白或非結(jié)構(gòu)蛋白上的免疫表位，也是針對FMDV的保護性免疫必不可少的成分，起到促進中和抗體的分泌、調(diào)整免疫反應(yīng)微環(huán)境的作用。同時，F(xiàn)MDV的感染也介導(dǎo)了感染細胞表面MHCI類分子的表達，影響FMDV感染細胞表面病毒抗原肽向CTLs的提呈，從而使病毒逃脫宿主的CTL細胞殺傷(F.Sobrino，2001)。

目前應(yīng)用的FMDV疫苗主要是滅活疫苗和弱毒疫苗。弱毒疫苗采用弱化病毒的方式，將母毒通過在豚鼠，雞胚或者細胞種經(jīng)過多代的培養(yǎng)弱化，使病毒逐漸發(fā)生基因突變，產(chǎn)生弱毒毒株。弱毒毒株在組織培養(yǎng)物中經(jīng)過大量擴增后，加入佐劑等制成疫苗。FMD弱毒疫苗在進行免疫預(yù)防的過程中，能產(chǎn)生一定水平的保護，對FMD的流行有一定的控制作用。但是由于弱毒疫苗是活病毒，在預(yù)防接種的過程中可能造成動物攜帶病毒的狀態(tài)，在易感動物體內(nèi)長期存活的過程中，弱毒的FMDV毒株很有可能恢復(fù)減弱了的毒力。同時，弱毒病毒在易感動物體內(nèi)的增殖也會對產(chǎn)生的保護免疫有抑制的作用，不能達到最佳的免疫效果。因此，弱毒疫苗的應(yīng)用受到了限制。滅活疫苗是大量擴增病毒后，經(jīng)過化學(xué)滅活處理，添加佐劑后制備的疫苗產(chǎn)品。FMDV滅活疫苗的免疫原性較好，由于制備過程中強毒的使用和病毒滅活不完全的可能性，潛在的不安全性影響其使用。所以，為了克服弱毒疫苗和滅活疫苗在安全上的隱患，迫切尋找一種安全有效的新的FMDV疫苗。

重組口蹄疫病毒蛋白疫苗是采用基因克隆的手段將口蹄疫病毒的抗原編碼基因進行克隆、重組、表達制備出的重組蛋白。由于重組蛋白疫苗只含有病原體的一部分，不會引起動物發(fā)病，在安全性方面有很大提高。另外，可以根據(jù)需要制備同一病毒多個成分或多價病毒疫苗。因此，重組口蹄疫病毒蛋白疫苗有廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供的應(yīng)用基因工程技術(shù)在大腸桿菌中生產(chǎn)的一種重組口蹄疫病毒融合蛋白疫苗，對O型口蹄疫病毒感染有防治作用。

本發(fā)明中，應(yīng)用重組口蹄疫病毒融合蛋白疫苗免疫豚鼠和牛，免疫后獲得的血清在乳鼠中和實驗中，具有良好的中和O型口蹄疫病毒的作用。

本發(fā)明提供的重組口蹄疫病毒融合蛋白疫苗在生產(chǎn)方式上區(qū)別于傳統(tǒng)滅活口蹄疫病毒疫苗，且在安全性上具有傳統(tǒng)滅活口蹄疫病毒疫苗無法比擬的優(yōu)勢。

本發(fā)明還涉及該重組口蹄疫病毒融合蛋白疫苗在制備用于防治動物口蹄疫病毒感染的生物制品中的用途以及含有該基因工程重組蛋白的疫苗制品。

本發(fā)明還涉及該重組口蹄疫病毒融合蛋白疫苗的施用對象、施用方法、藥物學(xué)載體和施用劑量。

本發(fā)明中術(shù)語的含義