[發明專利]一種提高牛乳中乳鐵蛋白含量的方法

無效

• 申請號: 200710097702.6
• 申請日: 2007-04-28
• 公開（公告）號: CN101292639A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 丁慶
• 申請（專利權）人: 丁慶
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

乳鐵蛋白(Lactoferrin，簡稱Lf)是一種主要的乳清蛋白，分子量約為8萬，大約由 700個氨基酸殘基構成，乳鐵蛋白因其晶體呈紅色，又稱“紅蛋白”，牛初乳中含量約1克/ 升，牛常乳含量約0.02-0.35克/升。具有多種生理功能：如促進鐵的傳遞和吸收、抗菌活性、 抗病毒作用、免疫作用、促進腸細胞的生長和雙歧桿菌的繁殖、天然抗氧化劑、調節骨髓細 胞生成等。

本發明通過提高抗原釋放劑ARD(Antigen?Releasing?Device)和免疫刺激復合物(ISCOMs) 的免疫原性和穩定性，擴大試驗動物的樣本含量，展開深入的研究，研究ISCOMs疫苗對奶牛 細胞免疫的影響規律，重點檢驗牛乳中乳鐵蛋白，為含高水平特異性抗體的免疫乳生產提供 試驗依據。

1、材料與方法

1.1樣品：抗原釋放劑ARD(Antigen?Releasing?Device)

選用澳大利亞Agri-BIOTECH公司生產的抗原釋放劑ARD(Antigen?Releasing?Device)， 免疫刺激復合物(ISCOMs)以不同濃度的聚交酯膠囊包被，分別在埋植后的0d、14d和28d 釋放出免疫刺激復合物引起奶牛的免疫應答產生免疫球蛋白。埋植槍及ARD設計示意圖見附 圖1。

1.2動物：

在北京市大興區滄達福奶牛場選擇泌乳前期的成年健康荷斯坦奶牛，以隱性乳房炎診 斷液進行乳房炎檢測剔除隱性乳房炎病牛，并根據其產奶量、年齡、胎次、泌乳階段選擇40 頭奶牛并分組，免疫組20頭(編號No.1～20)，對照組20頭(編號No.21～40)。參試奶牛 狀況見表1。于2006年11月16日對免疫組的20頭牛進行埋植ARD，埋植位點在奶牛骻內淋 巴結處，每頭牛埋植3種不同ARD，試驗期為4個月。

表1試驗奶牛狀況

試驗牛飼養管理按牛場的正常飼養管理程序進行，采用中產奶牛飼料配方，TMR飼喂， 精粗比為45∶55，糧組成及營養水平見表2。奶牛自由采食，記錄采食量，喂3次，飼喂時間 分別為7:00、14:00和20:00。擠奶3次，時間為7:00、14:00和20:00，采用Delaval魚骨 式擠奶臺進行機械擠奶，擠奶時“二次藥浴，一次紙巾擦干”。觀察奶牛健康狀況，尤其注意 是埋植后7d內的傷口是否發炎。

1.3試驗牛飼養管理及樣品的采集：

試驗牛飼養管理按牛場的正常飼養管理程序進行，采用中產奶牛飼料配方，TMR飼喂， 精粗比為45∶55，糧組成及營養水平見表2。奶牛自由采食，記錄采食量，喂3次，飼喂時間 分別為7:00、14:00和20:00。擠奶3次，時間為7:00、14:00和20:00，采用Delaval魚骨 式擠奶臺進行機械擠奶，擠奶時“二次藥浴，一次紙巾擦干”。觀察奶牛健康狀況，尤其注意 是埋植后7d內的傷口是否發炎。

表2試驗糧組成及營養水平

0d～10d每兩天記錄每頭牛的產奶量，于每天的固定時間測量每頭牛直腸體溫，采集每 頭牛的乳樣；21d～60d時每3天采集每頭牛的乳樣，每周記錄采食量、產奶量和體溫。采乳 樣時每天采集乳樣3次，按早中晚比例4∶3∶3混合，共取樣100mL，4℃保存；50mL于北京奶 牛中心檢測牛奶體細胞總數和乳脂、乳蛋白等常規成分；50mL奶樣用于分離乳清。

每組固定10頭牛用于采血(No.11～20；No.31～40)。采血時以采血針尾根動/靜脈采血，分 別以真空抗凝采集管和真空促凝采血管收集血液。凝固的血液用于分離血清，分裝于4個離 心管中-80℃保存待用。抗凝血分別用于MTT、流式細胞儀等檢測。

同時采集滄達福牛場其他奶牛的初乳樣品，每頭分娩奶牛每24h采集1次奶樣，每次采 集200mL以上，連續采集7d，用以分析比較免疫乳清和初乳乳清。收集乳樣的同時采集抗凝 和促凝血。

1.4實驗方法

1.4.1乳房炎和體細胞數檢測

取50mL乳樣以乳成分分析儀(型號：Fossomatic?5000、Milkoscan?4000)測定體細胞 數和乳脂率(Fat)、乳蛋白(Pro)、乳糖(Lac)、總固形物(TS)、非脂固形物(SNF)5項 常規成分。

1.4.2間接ELISA方法測定特異性抗Lipase的Ig