[發(fā)明專(zhuān)利]梔子苷元的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710094113.2
• 申請(qǐng)日: 2007-09-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101396455A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張彤;玄振玉;陶建生;盧毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K36/744
• 分類(lèi)號(hào): A61K36/744;C12P17/06;C12P19/60;A61P1/16;A61K131/00
• 代理公司: 上海浦一知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 丁紀(jì)鐵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用梔子苷制備梔子苷元的方法，屬中藥技術(shù)領(lǐng)域。?

中藥梔子為茜草科植物梔子Gardenia?jasminoides?Ellis的干燥成熟果實(shí)，含梔子苷(geniposide)、梔子苷酸(geniposidic?acid)、羥異梔子苷(gardenoside)、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷(genipin-1-β-D-gentiobioside)等環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分。以往研究認(rèn)為中藥梔子的保肝功效是梔子苷發(fā)揮作用的。但是隨著研究深入，逐漸發(fā)現(xiàn)梔子苷在大鼠肝組織勻漿中不能代謝，梔子中的環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分如果離開(kāi)腸道菌群，其治療作用將難以發(fā)揮，以及直接靜脈給予梔子苷并不產(chǎn)生利膽作用。深入研究表明，梔子苷是在腸道細(xì)菌(真桿菌sp.A-44等)所含活性酶的作用下轉(zhuǎn)化為梔子苷元，從而發(fā)揮出治療效果。還有研究表明中藥梔子的抗肝纖維化、抑制星狀細(xì)胞活性的起效成分也是梔子苷元，而不是梔子苷。梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷有可能是在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成梔子苷元而起效的。?

梔子苷、梔子苷元、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖甙的結(jié)構(gòu)式為：?

但是梔子苷元的獲得卻是本行業(yè)人員感到困難的地方。由于梔子苷元性質(zhì)活潑，本身容易和蛋白質(zhì)(酶)發(fā)生聚合反應(yīng)，采用常規(guī)的酶解提取方法來(lái)提取梔子苷元時(shí)(即條件是37℃、pH?5.0的環(huán)境中用葡萄糖苷酶反應(yīng)2小時(shí))，得率非常低，無(wú)法滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需求。因此，如果用梔子苷元直接作為藥用活性成分進(jìn)行保肝和抗肝纖維化的預(yù)防和治療，必需首先發(fā)明一種高得率的梔子苷元制備方法。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種用梔子苷制備高得率梔子苷元的方法。?

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出的用梔子苷制備梔子苷元的方法包括如下步驟：?

(1)酶解：將梔子苷和β-葡萄糖苷酶，混合加入pH3.75-4.95醋酸緩沖溶液中，在37.5-55.0℃水浴中反應(yīng)0.5-1.9小時(shí)；?

(2)萃取：用無(wú)水乙醚萃取，合并乙醚提取液，加入無(wú)水硫酸鈉，干燥30分鐘，濾過(guò)，再用微孔濾膜精濾；?

(3)結(jié)晶：低溫減壓回收溶劑，然后置于2-6℃的環(huán)境中，析晶，收集結(jié)晶，30-70℃干燥，得到酶解產(chǎn)物梔子苷元。?

本發(fā)明的優(yōu)選的技術(shù)方案包括如下步驟：?

(1)酶解：將梔子苷和β-葡萄糖苷酶，混合加入pH3.80-4.80醋酸緩沖溶液中，在40-53℃水浴中反應(yīng)0.8-1.8小時(shí)；?

(2)萃取：用無(wú)水乙醚萃取3次，合并乙醚提取液，加入無(wú)水硫酸鈉，干燥30分鐘，濾過(guò)，再用0.22μm微孔濾膜精濾；?

(3)結(jié)晶：低溫減壓回收溶劑，然后置于3-4℃的環(huán)境中，析晶，收集結(jié)晶，40-50℃干燥，得到酶解產(chǎn)物梔子苷元。?

進(jìn)一步，本發(fā)明在步驟(1)的酶解步驟的最優(yōu)選的條件為：?

將梔子苷和β-葡萄糖苷酶，混合加入pH4.5醋酸緩沖溶液中，在50℃水浴中反應(yīng)1.0小時(shí)。?

本發(fā)明人經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)篩選，得到本發(fā)明上述優(yōu)選和最優(yōu)選技術(shù)方案的：?

1.1溫度對(duì)酶水解的影響?

分別精密稱(chēng)取梔子苷0.5g，β-葡萄糖苷酶1g，于圓底燒瓶中，加入50ml?pH值為4.50的緩沖溶液，分別于25℃；30℃；37℃；45℃；50℃；55℃；65℃的不同溫度下，加熱磁力攪拌2h，放冷后用無(wú)水乙醚萃取三次(50ml*3)，合并乙醚層溶液，加入適量無(wú)水硫酸鈉，減壓回收乙醚，收集結(jié)晶。見(jiàn)表1。?

表1反應(yīng)溫度對(duì)酶水解的影響?