[發明專利]新型肽生成酶基因

無效

• 申請號: 200710093675.5
• 申請日: 2003-07-25
• 公開（公告）號: CN101067126A
• 公開（公告）日: 2007-11-07
• 發明（設計）人: 原誠一;橫關健三;阿部巧;外內尚人;城島恭子
• 申請（專利權）人: 味之素株式會社
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N1/21;C12P21/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉玥

1.編碼選自(I)和(U)的蛋白質的DNA，其中所述蛋白質具有如下定義的氨基酸序列：

(I)由SEQ?ID?NO：25的26-620位氨基酸殘基組成的氨基酸序列，或

(U)由SEQ?ID?NO：25組成的氨基酸序列。

2.一種包含根據權利要求1的DNA的重組DNA。

3.一種包含根據權利要求2的重組DNA的轉化細胞。

4.一種生產肽生成酶的方法，包括：

在培養基中，在適于生產肽生成酶的條件下，培養根據權利要求3的轉化細胞一段時期，和

在培養基和/或轉化細胞中累積肽生成酶。

5.一種生產二肽的方法，包括：

在培養基中，在適于在培養物中生產肽生成酶的條件下，培養根據權利要求3的轉化細胞一段時期，和

將培養物與羧基成分和胺成分混合，通過由所述DNA所編碼的肽生成酶所促進的酶催化作用，來合成二肽。

6.根據權利要求5的生產二肽的方法，其中所述細胞是屬于鞘氨醇桿菌屬的具有由羧基成分和胺成分生成二肽的能力的微生物。

7.根據權利要求5或6的生產二肽的方法，其中所述細胞是從所述培養物中分離的。

8.根據權利要求5或6的生產二肽的方法，其中所述細胞是經處理的微生物細胞產物。

9.編碼選自(J)和(V)的蛋白質的DNA，其中所述蛋白質具有如下定義的氨基酸序列：

(J)在SEQ?ID?NO：25的26-620位氨基酸殘基中，置換、缺失、插入、添加，和/或倒位一個或多個氨基酸所得的，且在50℃和pH?8下，具有SEQ?ID?NO：25的26-620位無突變的氨基酸殘基所對應的蛋白質的至少50％的肽生成活性的氨基酸序列，或

(V)成熟蛋白質區，其具有在SEQ?ID?NO：25的氨基酸序列中，包括置換、缺失、插入、添加，和/或倒位一個或多個氨基酸所得的的氨基酸序列，且其在50℃和pH?8下，具有無突變的SEQ?ID?NO：25所對應的蛋白質的至少50％的肽生成活性。

10.根據權利要求9的DNA，其中所述多個是2-50個氨基酸殘基。

11.一種包含根據權利要求9的DNA的重組DNA。

12.一種包含根據權利要求11的重組DNA的轉化細胞。

13.一種生產肽生成酶的方法，包括：

在培養基中，在適于生產肽生成酶的條件下，培養根據權利要求12的轉化細胞一段時期，和

在培養基和/或轉化細胞中累積肽生成酶。

14.一種生產二肽的方法，包括：

在培養基中，在適于在培養物中生產肽生成酶的條件下，培養根據權利要求12的轉化細胞一段時期，和

將培養物與羧基成分和胺成分混合，通過由所述DNA所編碼的肽生成酶所促進的酶催化作用，來合成二肽。

15.根據權利要求14的生產二肽的方法，其中所述細胞是屬于鞘氨醇桿菌屬的具有由羧基成分和胺成分生成二肽的能力的微生物。

16.根據權利要求14或15的生產二肽的方法，其中所述細胞是從所述培養物中分離的。

17.根據權利要求14或15的生產二肽的方法，其中所述細胞是經處理的微生物細胞產物。

18.選自(i)和(u)的DNA，其中所述DNA具有如下定義的堿基序列：

(i)由SEQ?ID?NO：24的104-1888位堿基組成的堿基序列，或

(u)由SEQ?ID?NO：24的29-1888位堿基組成的堿基序列。

19.一種包含根據權利要求18的DNA的重組DNA。

20.一種包含根據權利要求19的重組DNA的轉化細胞。

21.一種生產肽生成酶的方法，包括：

在培養基中，在適于生產肽生成酶的條件下，培養根據權利要求20的轉化細胞一段時期，和

在培養基和/或轉化細胞中累積肽生成酶。