[發明專利]一種生物涂層劑及其制備方法和在烤煙腋芽控制上的應用

有效

• 申請號: 200710093028.4
• 申請日: 2007-11-23
• 公開（公告）號: CN101313676A
• 公開（公告）日: 2008-12-03
• 發明（設計）人: 沈嘉祥;劉令輝;陳正邦;劉云輝
• 申請（專利權）人: 劉令輝
• 主分類號: A01N31/04
• 分類號: A01N31/04;C12P7/22;A01P21/00
• 代理公司: 重慶中之信知識產權代理事務所
• 代理人: 張景根

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體地說，涉及利用微生物發酵原理，從次生代謝產物中篩選出活性成分并加以應用的技術。

背景技術

烤煙是世界上100多個國家廣泛種植的經濟作物之一，田間栽培管理中的封頂打杈作業極其勞累費力。為提高煙葉產量及減輕勞累，從20世紀50年代開始，許多國家都先后應用化學藥劑抑制腋芽生長。我國從80年代開始，從國外引進Flumetralin(抑芽敏)，Maleichydrazide(抑芽丹、芽敵)、Pendimethalin(除芽通)、Butradlin(止芽素)等試驗使用。這些藥劑的抑芽效果各有千秋，但都是有機合成制劑，有殘留毒性，污染環境，對烤煙品質有影響，成本也較高，內吸性MH類品種目前已經禁用。近年來，為減少或消除化學農藥大量推廣應用帶來的種種弊端，各國人民要求控制公害保護環境的呼聲日益高漲，為此，國際《環境與發展大會》要求21世紀初，世界生物農藥應用比例將提高到占總體農藥的60％，世界平均水平目前不到10％，我國僅為2％，因此，積極研創生物制劑已是當務之急。

發明內容

本發明要解決的問題是提供一種更安全，無毒副作用，不污染環境，無殘毒顧慮，高效價廉的生物涂層劑，同時本發明提供了該生物涂層劑的制備方法和在烤煙腋芽控制上的應用。

本發明提供的生物涂層劑，其活性成分為β-苯乙醇，分子量為122，分子式是C₆H₅CH₂-CH₂OH，結構式為

上述生物涂層劑的制備方法，由下列步驟組成：

(1)、從植物中采集Botrytis?Cinerea?Persr真菌CGMCCNO?NO0357-1的病害標本，選擇新鮮、癥狀典型的標本進行表面消毒，用滅菌水沖洗，再用組織分離或直接孢子振落法進行單孢分離、純化培養，然后按照室內菌株篩選及生產工藝流程方法，選拔出生物活性強、固體發酵物產率為25％～30％、小麥抑芽快速檢測試驗抽提物稀釋至1500倍仍然有效的菌株，再誘變育種，反復比較篩選出高產菌株，依序編號，將菌種接入煮至半熟滅菌大麥粒上，放入-40℃～-60℃冰箱保存備用；

(2)、培養基每升使用去皮馬鈴薯200克水煮過濾，加葡萄糖10～15克，磷酸二氫鉀2.5～3克，動物蛋白胨1克，維生素B₁5毫克，檸檬酸0.1克，搖勻，室溫振搖培養8～10天，乙酸乙脂萃取抽提2次，濃縮，無水硫酸鈉脫水得粗抽品β-苯乙醇、對羥基苯乙醇等，放入-80℃低溫冰箱內保存備用；

(3)、將所得產物采用抑制小麥胚芽鞘生長法，進行室內快速生物測定篩選，將預先提取的待測粗抽品稀釋為100倍、200倍……1200倍系列濃度各5毫升，移入放有處理過的小麥種子的燒杯中，以剛好浸沒種子為宜，對照用清水，每一濃度重復3次，置26℃溫箱中培養7天，篩選出活性強，產率高的菌株培養所得粗品β-苯乙醇，并提供生測試驗；

(4)、經生測篩選到活性較高的組分，再用柱層析和TLC法純化，HPLC分析，應用IRV、UV、MS，結合HNMR儀器解析，確定活性成分β-苯乙醇的分子量、分子式和結構式。

將生物涂層劑用于烤煙栽培過程的腋芽控制上，采用滴涂或淋滴方式施用，達到了控制腋芽瘋長，收到了良好的抑芽效果。該涂層劑也可用于其它植物的封頂打杈，還可用于花卉、蔬菜保鮮，調控作物生育，改善品質、提高產量等。由于本發明的生物涂層劑是從植物中采集、分離、培養、萃取、過濾、干燥而得，整個加工過程安全無毒，不含有毒成分，因而不污染環境、無殘毒，生產成本低，價格便宜，每畝成本僅需8～9元，又能增進烤煙品質，控芽效果平均可達92％～98％。

具體實施方式

本發明提供的生物涂層劑，其活性成分為β-苯乙醇，分子量為122，分子式是C₆H₅CH₂-CH₂OH，結構式為

制備上述生物涂層劑時，按下列工藝步驟進行：