[發明專利]重組靶向殺傷白血病細胞的融合蛋白及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 200710092579.9
• 申請日: 2007-08-13
• 公開（公告）號: CN101139399A
• 公開（公告）日: 2008-03-12
• 發明（設計）人: 婁世鋒;鄧建川;陳林;陳姝;張萍;沈燕;陳妤;曾瀚慶;白鳳霞;廖樂樂;周慷;羅云
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學附屬第二醫院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K38/16;A61P35/02
• 代理公司: 重慶志合專利事務所
• 代理人: 胡榮琿

技術領域

本發明涉及遺傳工程技術領域，特別涉及一種用于靶向殺傷白血病細胞的融合蛋白及其制備方法和用途。

背景技術

急性髓性白血病(Acute?Myeloid?leukemia，AML)是我國急性白血病的主要類型。近年來骨髓干細胞移植和大劑量化療使AML的預后有顯著改善，但仍然有相當比例患者復發死亡。難治與耐藥也是治愈AML的重要障礙。此外，標準的治療措施對白血病細胞選擇性較低，常導致明顯的毒副作用并增加治療相關死亡率。

現在認為，白血病復發的根本原因是處于靜止期的白血病原始細胞(白血病干/祖細胞)對化/放療存在天然抵抗。急性髓性白血病干/祖細胞對臨床常用的柔紅霉素、阿糖胞苷敏感性很低^[2，7]，顯然，化/放療對處于增殖分裂期的白血病細胞可誘導臨床緩解，但少量處于靜止期的白血病干/祖細胞卻“逃避”了損傷，一定條件下又可自動進入增殖期“重建”白血病而導致復發(D.GaryGilliland，Craig?T.Jordan，and?Carolyn?A.Felix：The?Molecular?Basisof?Leukemia.Hematology?2004：80-97)。異基因干細胞移植能使部分AML患者治愈，主要得益于其移植物抗白血病效應(GVL)^[4]，該效應是一種免疫效應，其殺傷細胞機制與化放療明顯不同，可能對靜止期白血病干/祖細胞有作用。因此，探索與化放療殺傷機制不同的新穎的治療方法現已成為AML治療的重要研究方向。顯然，理想的新方法應該是對不同增殖周期的白血病細胞都有顯著的選擇性殺傷作用并能夠克服耐藥。

生物毒素對人體細胞的殺傷機制與化/放療顯著不同，由于其損傷是不可逆的，理論上無論處于靜止或增殖期細胞都不能逃脫(歐陽晶，王健偉，脫厚珍：白喉毒素類免疫毒素研究進展；中國生物工程雜志；2004，23：36-41)。這一重要性質強烈提示可作為白血病干/祖細胞的殺傷因素。常用的生物毒素有植物毒素和細菌毒素，前者為雙鏈蛋白質，屬核糖體失活蛋白，以蓖麻毒素為代表；后者為單鏈蛋白質，通過催化鏈延長因子2(elongation?factor?2，EF22)上的ADP核糖基化而抑制蛋白質合成，以白喉毒素及假單胞菌外毒素為代表。生物毒素毒力很強，1分子蓖麻或白喉毒素即可殺死1個細胞，其抗腫瘤作用近來是研究熱點。由于生物毒素非特異性毒性較強，必須對其分子進行改造，并與單克隆抗體/細胞因子構成特異性免疫毒素才能用于治療試驗。早期用化學方法連接毒素與載體蛋白的免疫毒素因為活性低、滲透性差、非特異性毒性仍較大等缺點現已少用，目前主張用基因重組技術融合載體蛋白，產量及活性更高，副作用更少(熊玉寧，王健偉：免疫毒素治療惡性血液病；國外醫學輸血及血液學分冊2000，23：31410。鄭菁，陳華庭，黎維勇：蓖麻蛋白毒素的研究進展；中國醫院藥學雜志2005，25：164)。使用重組蓖麻毒素A鏈構成免疫毒素，其特異性取決于載體，雖然可以減少毒副反應，但療效變得很不確定，現在認為B鏈對蓖麻毒仍然很重要。近來用白喉毒素與單抗或細胞因子構成免疫毒素治療惡性腫瘤成為研究熱點，但人群中因免疫預防常有白喉毒抗體，且白喉毒素治療劑量與中毒劑量非常接近，其臨床應用受到一定限制。