[發明專利]一種百日咳基因工程融合亞單位疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 200710092479.6
• 申請日: 2007-07-25
• 公開（公告）號: CN101199843A
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發明（設計）人: 鄒全明;章金勇;張曉麗;張衛軍;毛旭虎;郭剛;葛迪;石云;郭鷹;羅平
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: A61K39/10
• 分類號: A61K39/10;A61P31/04;A61P11/00;C07K19/00
• 代理公司: 重慶志合專利事務所
• 代理人: 胡榮琿

1.一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，該疫苗是由已知的百日咳毒素S1亞單位突變體連接一個肽段Fs所構成的融合蛋白。

2.根據權利要求1所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的百日咳毒素S1亞單位突變體為9K/1296。

3.根據權利要求1或2所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的肽段Fs為來自絲狀血凝素的包括138個氨基酸的肽段。

4.根據權利要求3所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的肽段Fs為具有SEQ?ID?NO：3所示的氨基酸序列組成的蛋白。

5.根據權利要求4所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的肽段Fs的編碼DNA為SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列或者編碼相同蛋白質的與其具有遺傳密碼簡并性的序列。

6.根據權利要求1或2所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的肽段Fs位于百日咳毒素S1亞單位突變體的氨基端。

7.根據權利要求1或2所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的肽段Fs與百日咳毒素S1亞單位突變體之間通過編碼連接子的一段核苷酸序列相連接。

8.根據權利要求8所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的編碼連接子的一段核苷酸序列為PQDPP。

9.根據權利要求1或2所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的融合蛋白的C端帶有6-His純化標簽。

10.根據權利要求1或2所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的融合蛋白具有SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列。

11.根據權利要求1或2所述的一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗，其特征在于，所述的融合蛋白的編碼DNA為SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列或者編碼相同蛋白質的與其具有遺傳密碼簡并性的序列。

12.一種百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，構建S1突變體；

步驟二，預測和鑒定FHA’中的Fs片段；

步驟三，構建重組工程菌pET-22b(+)-FsS1’/BL21；

步驟四，測定重組質粒的基因序列；

步驟五，誘導重組工程菌，表達獲得疫苗候選蛋白FsS1’；

步驟六，純化分離目的蛋白，采用親和層析柱對目的蛋白進行純化；

步驟七，鑒定目的蛋白的純度；

步驟八，鑒定融合蛋白的免疫原性。

步驟九，制成百日咳胞特氏桿菌雙亞單位基因工程疫苗。