[發(fā)明專利]用于epothilone生物合成的基因

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710089099.7
• 申請日: 1999-06-16
• 公開（公告）號: CN101161817A
• 公開（公告）日: 2008-04-16
• 發(fā)明（設計）人: T·斯徹普;J·M·利根;I·莫爾納;R·澤克爾;J·戈拉徹;D·西爾
• 申請（專利權）人: 諾瓦提斯公司
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N15/62;C12N15/63;C12P21/02;C12P9/00;C12N15/31;C07K14/195
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 羅菊華

1.一種分離的核酸分子，其中包含編碼至少一種參與epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列的互補體能夠與選自下組的核苷酸序列在下面定義的雜交條件下雜交：SEQ?IDNO：1的核苷酸43524-54920；所述雜交條件是在7％十二烷基硫酸鈉、0.5M?NaPO₄pH7.0、1mM?EDTA中于50℃雜交，在2×SSC、1％SDS中于50℃洗滌。

2.權利要求1的分離的核酸分子，其中包含其互補序列能與選自下組的核苷酸序列在下面定義的雜交條件下雜交的核苷酸序列：SEQID?NO：1的核苷酸43524-54920；所述雜交條件是在65℃雜交36小時，并用0.1×SSC和0.5％SDS于65℃洗滌20分鐘3次。

3.權利要求1或2的分離的核酸分子，其中包含編碼多肽的核苷酸序列，所述多肽包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：6。

4.權利要求1或2的分離的核酸分子，其中包含選自下組的核苷酸序列：SEQ?ID?NO：1的核苷酸43524-54920。

5.一種分離的核酸分子，其中包含參與epothilone生物合成的核苷酸序列，所述核苷酸序列的互補體能夠與選自下組的核苷酸序列在下面定義的雜交條件下雜交：SEQ?ID?NO：1的核苷酸42528-44760；所述雜交條件是在7％十二烷基硫酸鈉、0.5M?NaPO₄?pH7.0、1mM?EDTA中于50℃雜交，在2×SSC、1％SDS中于50℃洗滌。

6.權利要求5的分離的核酸分子，其中包含其互補序列能與選自下組的核苷酸序列在下面定義的雜交條件下雜交的核苷酸序列：SEQID?NO：1的核苷酸42528-44760；所述雜交條件是在65℃雜交36小時，并用0.1×SSC和0.5％SDS于65℃洗滌20分鐘3次。

7.權利要求5或6的分離的核酸分子，其中包含編碼多肽的核苷酸序列，所述多肽包含選自下組的氨基酸序列：SEQ?ID?NO：6。

8.權利要求5或6的分離的核酸分子，其中包含選自下組的核苷酸序列：SEQ?ID?NO：1的核苷酸42528-44760。

9.權利要求1-8中任何一項的分離的核酸分子，其中所述核苷酸序列分離自粘細菌。

10.權利要求9的分離的核酸分子，其中所述粘細菌是纖維堆囊菌(Sorangium?cellulosum)。

11.一種嵌合基因，其中包含權利要求1-10中任一項的核酸分子以及與之可操作連接的異源啟動子序列。

12.一種重組載體，其中包含權利要求11的嵌合基因。

13.一種重組宿主細胞，其中包含權利要求11的嵌合基因。

14.權利要求13的重組宿主細胞，它是細菌。

15.權利要求14的重組宿主細胞，它是放線菌(Actinomycete)。

16.權利要求15的重組宿主細胞，它是鏈霉菌(Streptomyces)。

17.一種Bac克隆，其中包含權利要求1-10中任一項的核酸分子。

18.權利要求17的Bac克隆，它是pEP015。

19.在重組宿主中異源表達epothilone的方法，包括：

a)將權利要求11的嵌合基因導入宿主；和

b)在適合宿主生物合成epothilone的條件下培養(yǎng)宿主。

20.生產epothilone的方法，包括：

a)用權利要求19的方法在重組宿主中表達epothilone；和

b)從重組宿主中提取epothilone。