[發(fā)明專利]結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子的沉降抑制方法及含其的試劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710086392.8
• 申請日: 2007-03-15
• 公開（公告）號: CN101266244A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田中睦
• 申請（專利權(quán)）人: 愛芙樂賽制藥株式會社
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531;B01J13/00;G01N33/543;G01N33/553
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 孫秀武;李平英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及結(jié)合有抗體或抗原等具有反應性的物質(zhì)的微小粒子 (以下，稱為結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子)的沉降抑制方法以及使用 了該結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子的免疫測定用試劑.特別是涉及主要 在臨床檢查領(lǐng)域中在利用了抗原抗體反應的免疫學測定中使用的結(jié)合 反應性物質(zhì)的微小粒子的沉降抑制方法以及使用了該結(jié)合反應性物質(zhì) 的微小粒子的免疫測定用試劑.

背景技術(shù)

近年來，對于臨床檢查等各種檢查而言，從自動化和縮短測定時 間的觀點出發(fā)，廣泛使用利用免疫反應測定生物試樣中的物質(zhì)的方 法.作為該免疫測定方法，可以舉出RIA法、EIA法、免疫比濁法、 膠乳凝集法、膠體金凝集法、免疫色譜法等。其中，膠乳凝集法、膠 體金凝集法等使用了結(jié)合有具有反應性的物質(zhì)的微小粒子(結(jié)合反應 性物質(zhì)的微小粒子)的方法不需要進行反應液的分離、洗滌操作，因 此特別適用于測定的自動化以及縮短時間.

但是，這些膠乳凝集法、膠體金凝集法由于結(jié)合反應性物質(zhì)的微 小粒子易于沉降，因此在使用時或測定時必須經(jīng)常攪拌以使得該微小 粒子的濃度均勻，具有易于產(chǎn)生測定誤差的問題.

例如，在上述方法中使用的試劑通常由2種試劑構(gòu)成，即主要含 有輔助試樣的稀釋、試樣在主反應前的前處理和主反應的成分的第一 試劑；含有作為主要參與反應的主成分的結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子 的第二試劑.使用自動化分析裝置時，首先將試樣和第一試劑分注到 反應池中，經(jīng)過一段時間后在反應池中分注第二試劑，從而將試樣、 第一試劑和第二試劑三者混合，得到最終反應液，進行測定。此時， 即便將含有結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子試劑(第二試劑)放置在分析 裝置中，也需要每隔一定時間攪拌第二試劑，使?jié)舛茸兊镁鶆颉?

以往一直都沒有進行抑制這種結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子的沉降 的研究。對于上述第一試劑、第二試劑和最終反應液的組成而言，僅 是為了提高微小粒子反應性的穩(wěn)定性、促進反應而進行了改良(例如 專利文獻1和2)。

在專利文獻1中，作為使致敏金屬膠體的反應性穩(wěn)定化的方法， 記載了使含有致敏金屬膠體的溶液含有選自從鈣離子和鎂離子及鈀離 子中選擇的金屬離子、硫酸葡聚糖、膽酸、脫氧膽酸、黃尿酸或它們 的鹽中的1種或2種以上。

在專利文獻2中，記載了在使結(jié)合有測定對象物質(zhì)的抗體(或抗 原)的膠體金粒子與測定物質(zhì)反應的溶液(最終反應液)中，含有0.4～ 2.5(W/W)％的平均分子量約為20,000以上的聚陰離子或其鹽作為反 應促進劑。

專利文獻1：日本特開平11-101799號公報

專利文獻2：日本特開平6-213891號公報

發(fā)明內(nèi)容

因此，為了減小測定值的誤差，需求一種抑制結(jié)合反應性物質(zhì)的 微小粒子的沉降、長期且穩(wěn)定地保持試劑或反應液中的濃度的技術(shù)。 特別是在自動分子裝置中，在放置試劑后，如果疏于攪拌操作則有可 能產(chǎn)生測定誤差、導致臨床判斷錯誤，因此開發(fā)結(jié)合反應性物質(zhì)的微 小粒子在溶液中的沉降抑制方法以及使用了方法的測定試劑非常重 要。

因此，本發(fā)明的目的在于提供抑制結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子在 分散液中該微小粒子沉降的方法。本發(fā)明的目的還在于，提供在靜置 保存后或放置在自動免疫分析裝置中后不需要再次通過攪拌操作使其 分散的、測定誤差小的試劑。

本發(fā)明人為了達成上述課題而進行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在結(jié) 合反應性物質(zhì)的微小粒子的分散液中，通過使選自聚陰離子及其鹽、 葡聚糖、環(huán)糊精、聚乙二醇、丙三醇中的至少1種化合物共存，可以 抑制結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子的沉降、可以長期且穩(wěn)定地保持分散 液中的結(jié)合反應性物質(zhì)的微小粒子的濃度，進而完成本發(fā)明。

本發(fā)明提供結(jié)合有具有反應性的物質(zhì)的微小粒子的沉降抑制方 法，該方法包括在該微小粒子的分散液中共存有選自聚陰離子及其 鹽、葡聚糖、環(huán)糊精、聚乙二醇、丙三醇中的至少1種化合物的工序.

對于1個實施方式而言，在上述分散液中含有0.3～5質(zhì)量％的上 述聚陰離子或其鹽、0.1～5質(zhì)量％的上述葡聚糖、0.1～5質(zhì)量％的上述 環(huán)糊精、0.3～5質(zhì)量％的上述聚乙二醇、或5～40質(zhì)量％的上述丙三 醇.

在其他實施方式中，上述聚陰離子及其鹽是具有硫酸基的水溶性 高分子化合物.

在其他實施方式中，上述聚陰離子是硫酸葡聚糖或肝素.