[發明專利]一種純化制備愛啡肽的新工藝

有效

• 申請號: 200710076636.4
• 申請日: 2007-08-23
• 公開（公告）號: CN101372506A
• 公開（公告）日: 2009-02-25
• 發明（設計）人: 何平;袁建成;馬亞平
• 申請（專利權）人: 深圳市翰宇藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/16
• 代理公司: 深圳市精英專利事務所
• 代理人: 李新林

技術領域

本發明涉及醫藥化工領域，具體涉及一種應用高速離心分離色譜法 (FCPC)制備高純度愛啡肽的新工藝。

背景技術

愛啡肽(Eptifibatide)是一種含有巰基丙酰及六個氨基酸殘基的環 狀多肽，分子式為C₃₂H₄₉N₁₁O₉S₂，是血小板糖蛋白GPIIb/IIIa受體拮抗劑， 可阻斷由各種激活劑引起的血小板聚集反應，是已知最強的特異性血小板 聚集抑制劑，主要用于防止心肌供氧動脈閉塞，心臟病發作，不穩定性心 絞痛、無Q波心肌梗塞、冠脈介入治療引起的猝死。

該多肽經過多步合成、氧化、裂解工序，帶有大量的難溶性雜質，使 得該產品粗品前處理非常的困難，人工合成粗品的溶解性非常差，制約了 反相純化時的上樣量，合成的裂解工藝中使用了大量的TFA，在純化中必須 去除，在樣品前處理時如果加入大量的有機溶劑，反相純化多肽樣品難于 吸附上固定相，達不到分離的目的。

目前采用的純化制備方法是用反相高壓液相色譜法分離純化得到的。 該方法優點是簡單、通用，適合于大多數的多肽純化，但缺點是不容易實 現大規模生產，且生產設備十分昂貴，投入非常的大。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種應用高速離心分離色譜法(FCPC)制備 高純度愛啡肽的新工藝，不需要固體填料，采用兩相互不混溶的溶劑體系 在色譜柱管中的接觸，由于離心力的作用，其中一相停留在色譜柱內，成 為固定相，另一相被泵到色譜柱中，稱之為流動相。待分離的組分由于在 兩相里不同的分配系數K′，達到分離的目的。由于不使用類似反相HPLC的 固體硅膠填料，因而沒有不可逆吸附，具有樣品無損失，無污染，快速高 效和適合大規模生產的優點。

本發明的實現方法是：在樣品前處理時可加入多種的有機溶劑，其溶 劑體系由A、B、C三個組分組成，A組分可以是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、 乙酸乙酯、石油醚；B組分可以為甲醇、乙醇、乙腈、丙酮；C組分為水， 體積比為2-4：1-3：2-6。經過一次分離，有70％的目標肽色譜純度大于98％， 剩下純度不夠的經再次回收純化。

經過高速離心分離色譜法(FCPC)制備的愛啡肽以TFA鹽的形式存在， 還需要將其轉換成醋酸，TFA在經過離子交換樹脂時得以去除。其工藝步驟 為：

a、將人工合成的愛啡肽粗品用選定的溶劑溶解；

b、將溶解好的愛啡肽粗品經過高速離心分離色譜(FCPC)分離純化， 紫外檢測器于230nm處監測，分段收集目的峰；

c、將收集的餾分用HPLC檢測，純度大于98％的餾分合并，待下一步 處理，純度小于98％的餾分再次回收純化；

d、將純度合格的餾分經過離子交換，去除三氟乙酸(TFA)，轉換成 醋酸愛啡肽，達到藥用級標準。

本發明的優點在于：

1、用高速離心分離色譜法(FCPC)分離純化愛啡肽，由于沒有使用小 顆粒的反相硅膠填料，溶解樣品可以加入有機溶劑，降低了樣品前處理難 度，更有利于工業化規模生產。

2、由于沒有硅膠的吸附，減少了樣品的損失及被污染的幾率。

3、應用離子交換樹脂去除TFA的同時轉換成了醋酸鹽，方便，快捷， TFA的殘留低于0.25％。

具體實施方式

下面以實例對本發明做進一步詳細說明：

實施例一：

采用Pi1ot-Scale制備型高速離心分離色譜儀(FCPC)，溶劑選用二氯 甲烷-乙腈-水體系制備愛啡肽。首先以2：1：3的體積比將上述溶劑體系 配置于分液漏斗中，搖均后靜置分層。將上下層分開，取上相為固定相， 下相為流動相。取愛啡肽粗品100克，溶解在1升上述混合體系中，用0.45um 的有機相濾膜過濾，待純化。采用法國Kromaton制備型高速離心分離色譜 儀，轉子體積5升，先用固定相充滿整個柱子，調節主機轉速到1000rpm， 以150ml的流速將流動相泵入柱內。待整個體系平衡后，通過泵將溶解好 的樣品注入色譜柱內，然后根據檢測器紫外譜圖分段接收目標成分。收集 餾分經過HPLC檢測，純度大于98％的餾分合并，待下一步處理，純度小于 98％的餾分需要再次回收處理。