[發明專利]診斷人乳頭瘤病毒感染的熒光PCR方法

在審

• 申請號: 200710076584.0
• 申請日: 2007-08-24
• 公開（公告）號: CN101251469A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發明（設計）人: 楊夢甦;黃鶴;黃明輝;柏干榮
• 申請（專利權）人: 港龍生物技術（深圳）有限公司
• 主分類號: G01N21/00
• 分類號: G01N21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.?一種診斷人乳頭瘤病毒(HPV)感染的熒光PCR方法，包括以下部分：

(1)與多達6種HPV?DNA互補的寡核苷酸序列用于PCR擴增臨床樣品中獲得DNA的引物；在這里，每一個型別的引物序列包含：

(a)一個能與一種HPV型基因對應的靶序列上游第一個位點雜交的正向引物；

(b)一個能與一種HPV型基因對應的靶序列下游的第二個位點雜交的反向引物；

(c)正向引物和反向引物不限于本說明書序列表列明的序列。

(2)用于檢測HPV的熒光標記一個或多個寡核苷酸序列探針，該探針能與位于靶序列中上述第一和第二個位點雜交之間的HPV序列雜交。探針序列可以是SEQ?ID?No.1-6的序列或其互補序列，還可包括由所列序列或其互補序列衍生出來的、差別不大于8個堿基的寡核苷酸序列。

(3)對取得的樣品進行PCR擴增，其特征在于包括一對或多對引物及探針，以HPV?DNA作為模板，一個反應體系中擴增一個或多個HPV?DNA目標靶序列片段。通過檢測PCR反應體系中一個或多個不同熒光信號的變化，確定樣品中是否感染HPV，以及HPV的含量。

2.?根據權利要求1所述的熒光檢測，其特征在于所述用于復合檢測的熒光探針為TaqMan探針，標記探針5’端的為一種熒光報告基團(包括但不限于以下幾種：FAM、TET、JOE、VIC、HEX、ROX、TAMRA、CY3、CY3.5、CY5、CY5.5、Oregon?Green、CAL?Red、Red?640、Texas?Red)，3’端為一種熒光淬滅基團(包括但不限于以下幾種：TAMRA、DABCYL、ECLIPSE、NFQ)，探針的3’端可以是帶有DNA小溝復合物(MGB，Minor?Groove?Binder)修飾。

3.?根據權利2要求所述的反應體系中，可使用一個或多個熒光探針，所標記的熒光報告基團可以為一種或多種。