[發明專利]利用靜息細胞制備蛹蟲草生產種的方法

無效

• 申請號: 200710075869.2
• 申請日: 2007-07-11
• 公開（公告）號: CN101126072A
• 公開（公告）日: 2008-02-20
• 發明（設計）人: 喻孟君;鄭貴朝
• 申請（專利權）人: 東莞市生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 東莞市冠誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 覃業軍

技術領域

本發明涉及生物菌種制備領域，具體涉及一種利用靜息細胞制備蛹蟲草生產種的方法，

技術背景

蛹蟲草(Cordyceps?militaris)又名北冬蟲夏草、北蟲草、蟲草，隸屬真菌門、子囊菌亞門、麥角菌目、麥角菌科、蟲草屬，是蟲草屬的模式種，為自然界特有的一類具有神奇藥用與滋補功能的珍貴藥用真菌。目前全世界已知的蟲草類有350余種，我國已正式發表的有拉丁學名的蟲草共68種。

我國人民很早就對蟲草有深刻的認識和研究，認為蟲草具有保肺益精、補精填髓、止血化痰、可治百虛百損，《本草從新》中就有“冬蟲夏草甘平保肺，益腎，補精髓，止血化痰，已勞咳，治膈癥皆良”的記載。中醫認為，蟲草入肺腎二經，既能補肺陰，又能補腎陽，是唯一的一種能同時平衡、調節陰陽的中藥。現代醫學研究進一步表明蟲草對人體有以下功能：能平喘止咳，對肺氣腫、氣管炎有較好療效；具有壯陽補腎、增強體力、精力、提高大腦記憶力的功效；能明顯降低血糖、尿糖，對糖尿病患者有明顯療效；降低血壓、顱壓，緩解高血壓、腦血栓、冠心病、手足麻木等病癥；抗菌、抗炎、抗癌、抑癌、能明顯增強機體免疫功能；潤膚美容，尤其可快速消除“蝴蝶”斑。其獨特的抗菌、抗病毒、抗癌以及提高機體免疫力等能力方面是其他食品所不能比擬的。

由于野生冬蟲夏草生長地理的特殊要求以及嚴格的寄生性，造成冬蟲夏草資源極其稀少，加之采收的不易更使得野生冬蟲夏草資源十分缺乏，因而導致野生冬蟲夏草價格昂貴，難于普及，且由于野生冬蟲夏草的大量采挖，已嚴重破壞了自然植被資源，為了保護生態環境和野生動植物資源，世界許多國家都在努力研究和開發蟲草的人工培育，我國更是如此，國家已把野生冬蟲夏草列為國家二級保護植物，明令限制采挖，大力提倡和發展蟲草的人工培育。

目前已知的蟲草類中，在現有的相關科研工作未獲突破性進展的情況下，蛹蟲草是蟲草屬中唯一可馴培的。通過分析測試表明，人工栽培的蛹蟲草子實體和野生冬蟲夏草的各種化學成份和含量基本相同，有些有效成份含量高于野生冬蟲夏草。人工蛹蟲草子實體蛋白質含量高達40.7％，比野生冬蟲夏草高15倍；含有蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖、超氧化物歧化酶(SOD)以及亞油酸和軟脂酸，其中蟲草素的含量比野生冬蟲夏草高3-5倍，亞油酸和軟脂酸則高40％以上；氨基酸種類齊全，含量豐富，比例適當；含有21種微量元素，錳、銅、磷、鈣、鐵、鋅、硒等的含量非常豐富。

在現有公開的蛹蟲草培育技術中，對蛹蟲草生產種的制備都是采用試管斜面種轉接，區別只是在試管斜面種的母代或是組織分離得來，或是孢子分離得來。在實踐中，我們發現這種生產種制備方式存在以下缺陷：1、同一母代得到的不同試管斜面種之間性狀表現有差異，有好有壞，參差不齊，難以把握；2、同一試管斜面種的不同部位制備的生產種之間的性狀表現也存在差異。這將導致子實體的產量和質量不穩定。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用靜息細胞制備蛹蟲草生產種的方法，以解決斜面試管種轉接制備生產種的缺陷，確保子實體的產量和質量。

本發明所提出的利用靜息細胞制備蛹蟲草生產種的方法，包括：

A、分離得到菌株；

B、配制M₁培養基，將分離得到的菌株于M₁培養基中培養，控制溫度，適度振蕩，掌握培養時間；

C、配制M₂培養基，無菌條件下抽濾收集菌絲，菌絲經無菌蒸餾水清洗，置M₂培養基中懸浮備用；

D、將M₂培養基及菌絲接入滅菌后的M₁培養基中培養適當時間，控制溫度，適度振蕩，即得到生產種。

所述分離得到菌株的方法可以采用孢子分離，或母代分離，或組織分離。

所述M₁培養基的配方為蒸餾水0.8～1.2升，馬鈴薯190～210克，葡萄糖13～17克，磷酸二氫鉀0.8～1.2克，硫酸鎂0.4～0.6克，蛋白胨2.1～2.3克，PH值6.1～6.3，并且至少在121℃濕熱條件下滅菌至少30分鐘。

所述M₂培養基之配方為蒸餾水0.8～1.2升，磷酸二氫鉀0.8～1.2克，硫酸鎂0.4～0.6克，放線菌酮18～22毫克，PH值6.1～6.3，并且至少在121℃濕熱條件下滅菌至少30分鐘。

本發明利用靜息細胞制備蛹蟲草生產種的方法之B中，菌株于M₁培養基中培養的溫度控制在18～22℃為宜。