[發(fā)明專利]一種擬南芥的水培方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710071562.5
• 申請日: 2007-10-09
• 公開（公告）號: CN101142893A
• 公開（公告）日: 2008-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 都韶婷;章永松;林咸永
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: A01G31/00
• 分類號: A01G31/00;A01G31/02
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 唐銀益

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種培育擬南芥的方法，特別是擬南芥的水培方法。

背景技術(shù)

擬南芥是國際上第一個完成全部基因組序列測定的高等植物，利用其作為模式植物進行植物功能基因組學(xué)的研究在世界各國開展得如火如荼。利用擬南芥開展植物學(xué)研究，能為挖掘植物體內(nèi)多種代謝途徑的信息、發(fā)現(xiàn)并克隆重要基因提供基礎(chǔ)試驗材料。目前，擬南芥的培養(yǎng)方式主要有泥炭和蛭石的混合營養(yǎng)介質(zhì)與營養(yǎng)液培養(yǎng)兩種方式。其中，水培是實驗室常見的一種栽培方式；但國內(nèi)外報道的水培方法存在著一定的不足，其最大缺點是易染菌或出現(xiàn)干枯現(xiàn)象。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種能有效提高擬南芥的存活率、且操作簡便的擬南芥的水培方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種擬南芥的水培方法，包括以下步驟：

1)、種子的萌發(fā)：

將經(jīng)春化處理后的擬南芥所得的種子在培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)成幼苗，直至根部長至0.9～1.1cm；

2)、制作培養(yǎng)工具：

選用頂部和底部均設(shè)有開口的管子作為培養(yǎng)管，將培養(yǎng)管固定在盛有1/4濃度的霍格蘭營養(yǎng)液的容器內(nèi)；然后將滅菌處理后的蛭石放入培養(yǎng)管內(nèi)，蛭石的放置高度占培養(yǎng)管高度的80％～100％，蛭石吸收營養(yǎng)液后成濕潤的蛭石，培養(yǎng)管的高度為2.6～3.0cm，培養(yǎng)管的內(nèi)徑為9～11mm；

3)、移苗：

在培養(yǎng)室內(nèi)，將步驟1)所得的幼苗放入步驟2)所得的培養(yǎng)管內(nèi)，使幼苗的根部接觸濕潤的蛭石；培育8～9天后，得小苗；所述培養(yǎng)室內(nèi)溫度為20～28℃、濕度為60％～80％；光源采用由白光和紅光燈間隔組成的生物效應(yīng)燈，光源的開啟時間為10-12h；

4)、育苗：

先去除培養(yǎng)管內(nèi)的蛭石，在作為水培裝置的水槽內(nèi)放置1/4濃度的霍格蘭營養(yǎng)液；再將上述培養(yǎng)管豎直放入位于培養(yǎng)室內(nèi)的水槽中，使小苗的根系浸沒在霍格蘭營養(yǎng)液中；培養(yǎng)室內(nèi)溫度為20～28℃、濕度為60％～80％，光源采用由白光和紅光燈間隔組成的生物效應(yīng)燈，光源的開啟時間為10-12h。

作為本發(fā)明的擬南芥的水培方法的改進：步驟4)中，每周更換1次霍格蘭營養(yǎng)液，并向霍格蘭營養(yǎng)液內(nèi)灌輸氧氣；步驟2)中，培養(yǎng)管的底部開口與容器的底部相距0.8～1.2cm，容器選用96孔離心管盒，培養(yǎng)管由eppendorf管改裝而成；步驟3)中，用尖頭鑷子將步驟1)所得的幼苗放入步驟2)所得的培養(yǎng)管內(nèi)。

在本發(fā)明中，1/4濃度的霍格蘭營養(yǎng)液指的是：將常規(guī)的霍格蘭營養(yǎng)液與水以1∶3的體積比混合后所形成的。步驟4)的育苗時間視實際的具體要求而定；即當(dāng)擬南芥的根系達到實際所需的長度時，就可結(jié)束育苗。

本發(fā)明擬南芥的水培方法，在步驟2)中，將培養(yǎng)管放置于96孔離心管盒中，適用于大批量育苗試驗，且有利于保持適宜擬南芥幼苗成活的濕度。采用eppendorf管改裝成培養(yǎng)管能反復(fù)使用，因此可降低生產(chǎn)成本；且eppendorf管為實驗室常見耗材，價格低廉。在步驟3)中，將擬南芥幼苗放在裝有蛭石的培養(yǎng)管中培養(yǎng)，可以降低該過程的染菌率；在本發(fā)明中，染菌率幾乎為零。移苗全過程未直接接觸手，因而也不會產(chǎn)生人為操作不當(dāng)(如有些方法采用海綿包裹移栽)引起的幼苗死亡。只要能在培養(yǎng)皿里面正常發(fā)芽的幼苗，按本發(fā)明的方法栽培均能存活，因而大大提高存活率。

本發(fā)明的擬南芥的水培方法，具有操作簡便、成本低廉、不易染菌、成活率極高的優(yōu)點。

附圖說明

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細(xì)說明。

圖1是本發(fā)明的步驟3)移苗狀態(tài)剖視示意圖；

圖2是本發(fā)明的步驟4)育苗狀態(tài)剖視示意圖。

具體實施方式

一種擬南芥的水培方法，依次進行以下步驟：

1)、種子的萌發(fā)：

用75％的酒精消毒經(jīng)春化處理后的擬南芥所得種子10min，后用無菌水洗滌3次，隨后播種于位于培養(yǎng)皿中的滅菌MS培養(yǎng)基上(去蔗糖的MS培養(yǎng)基，見表1)，調(diào)節(jié)pH至5.7，瓊脂糖濃度為0.55％。播種完畢后，用Parafilm封口膜將培養(yǎng)皿包裹一圈，以免水分蒸發(fā)并避免染菌。隨后于培養(yǎng)室內(nèi)放置4～5天，根長約1cm時即成幼苗4，可用于移苗。培養(yǎng)條件為溫度20～28℃，用室內(nèi)加濕器加濕至濕度為60％～80％；光源采用由白光和紅光燈間隔組成的生物效應(yīng)燈，光源的開啟時間(即所設(shè)置的白天時間)為8h，種子距離光源25～30cm(也可用市售的擬南芥專用培養(yǎng)架)。

表1去蔗糖MS培養(yǎng)基配方