[發明專利]一種乙酸萘酯酶的提取方法

有效

• 申請號: 200710071204.4
• 申請日: 2007-09-06
• 公開（公告）號: CN101148660A
• 公開（公告）日: 2008-03-26
• 發明（設計）人: 張安平;嚴航貞;葉璟;劉維屏;趙美蓉;張宏華;苗優娜
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司
• 代理人: 黃美娟;袁木棋

1.一種乙酸萘酯酶的提取方法，所述方法包括如下順序步驟：

(1)將含有乙酸萘酯酶的植物種子去皮磨粉，0～4℃下、用8～15倍質量的蒸餾水浸泡12～18h，取上清液2000～6000r.p.m、0～4℃離心，取上清液，得酯酶粗提液；所述含有乙酸萘酯酶的植物種子來自下列之一的作物：①小麥、②蕎麥、③黃豆、④玉米、⑤水稻、⑥大麥；

(2)冰浴條件下，往酯酶粗提液中加入硫酸銨，使酶液中硫酸銨飽和度為50～75％，再于3000～5000r.p.m、0～4℃離心，取沉淀，用pH6～7的磷酸緩沖液稀釋2～10倍，得稀釋后的酶液；

(3)將稀釋后的酶液用10～30倍體積的蒸餾水透析，直至不產生沉淀為止，酶液再經濃縮、干燥，得所述乙酸萘酯酶。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中蒸餾水浸泡時間為15h。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中所用磷酸緩沖液pH值為6.38。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中濃縮步驟為：采用真空冷凍干燥機，0～4℃下濃縮酶液至固體。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(3)中濃縮步驟為：將酶液裝入透析袋中，用聚乙二醇6000做干燥劑，4℃下濃縮至體積為濃縮前酶液體積的1/5～1/3。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法按如下順序步驟進行：

(1)將含有乙酸萘酯酶的植物種子去皮磨粉，0～4℃下、用10倍質量的蒸餾水浸泡15h，取上清液4500r.p.m、0～4℃離心，取上清液，得酯酶粗提液；

(2)冰浴條件下，往酯酶粗提液中加入硫酸銨，使酶液中硫酸銨飽和度為50％，再于4500r.p.m、0～4℃離心，取沉淀，用pH6.38的磷酸緩沖液稀釋4倍，得稀釋后的酶液；

(3)將稀釋后的酶液用20倍體積的蒸餾水透析24h后，酶液采用真空冷凍干燥機，4℃下濃縮酶液至固體，并冷凍干燥，得所述乙酸萘酯酶。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法按如下順序步驟進行：

(1)將含有乙酸萘酯酶的植物種子去皮磨粉，0～4℃下、用10倍質量的蒸餾水浸泡15h，取上清液4500r.p.m、0～4℃離心，取上清液，得酯酶粗提液；

(2)冰浴條件下，往酯酶粗提液中加入硫酸銨，使酶液中硫酸銨飽和度為50％，再于4500r.p.m、0～4℃離心，取沉淀，用pH6.38的磷酸緩沖液稀釋4倍，得稀釋后的酶液；

(3)將稀釋后的酶液用20倍體積的蒸餾水透析24h后，酶液裝入透析袋中，用聚乙二醇6000作干燥劑，用量為4mL/g酶液，4℃下濃縮酶液至體積為濃縮前酶液體積的1/5～1/3，得所述乙酸萘酯酶。