[發(fā)明專利]三葉青的組培快速繁殖方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710070701.2
• 申請(qǐng)日: 2007-08-06
• 公開（公告）號(hào): CN101103700A
• 公開（公告）日: 2008-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜維梅;趙云鵬;傅承新
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;C12N5/04;A01G31/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 張法高

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種三葉青的組培快速繁殖方法。

背景技術(shù)

植物是藥物的天然寶庫(kù)，人類利用藥用植物來防病治病已有幾千年歷史。全世界約有75％的人口以植物作為治療疾病的藥物來源(刑建民，2001)。當(dāng)今的處方藥有25％左右來自于藥用植物(邱德有，2000)。隨著經(jīng)濟(jì)和醫(yī)療保健事業(yè)的飛速發(fā)展，中藥資源的需求出現(xiàn)了空前的增長(zhǎng)，從中藥中提取有效成分應(yīng)用于化妝品、食品及工業(yè)原料的研究也越來越深入，這些原因在不同程度上加大了中藥資源的壓力。加之長(zhǎng)期以來，對(duì)開發(fā)利用中藥資源的認(rèn)識(shí)不足，一些地區(qū)不同程度上對(duì)中藥資源進(jìn)行了掠奪式的過度采收，致使很多中藥資源蘊(yùn)含量下降，甚至耗竭，一些種類瀕臨滅絕(黃璐琦，2001)。生物技術(shù)的蓬勃發(fā)展為從根本上改變傳統(tǒng)藥材的生產(chǎn)提供了一個(gè)嶄新的方法。植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)則是其中一個(gè)重要的手段。近年來，國(guó)內(nèi)外在這方面已做了大量工作，已成功離體培養(yǎng)獲得試管植株的藥用植物有200多種。

三葉青(Tetrastigma?hemsleyanum?Diels?et?Gilg)為葡萄科崖爬藤屬多年生常綠草質(zhì)蔓生藤本。異名為蛇附子(《植物名實(shí)圖考》)，石抱子(《江西草藥》)，金線吊葫蘆、三葉對(duì)(《浙江民間常用草藥》等，為民間常用的中草藥(中藥辭海，1993)。三葉青常生長(zhǎng)于山坡或山溝，溪谷兩旁林下陰處。主要分布在浙江、江西、福建、湖北、湖南，廣東、四川、貴州、云南、臺(tái)灣等地(浙江植物志，1993)。三葉青以塊根或全草入藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、活血止痛的功能，用于治療高熱驚厥、肺炎、哮喘、肝炎、風(fēng)濕、月經(jīng)不調(diào)、咽痛、瘰疬等癥，具有很好的療效(中藥辭海，1993)。有關(guān)三葉青的化學(xué)成分研究近幾年非常熱門，三葉青不同部位化學(xué)成分的鑒定也有較多報(bào)道。三葉青根中含槲皮素、山柰酚、山柰酚一3一O一新橙皮糖苷、β-谷甾醇、胡蘿卜苷及6‘一O-苯甲酰基胡蘿卜苷(楊大堅(jiān)，1998：李瑛琦，2003)。三葉青地上部分含蒲公英萜醇、蒲公英萜酮、β一谷甾醇及麥角甾醇(劉東，1999)。藥理實(shí)驗(yàn)表明三葉青提取物具有一定的腫瘤抑制作用(楊大堅(jiān)，1998；丁鋼強(qiáng)，2005；馮正權(quán)，2006)、顯著的抗病毒及抗出血熱的作用(楊學(xué)樓，1989；楊大堅(jiān)，1998)和明顯的消炎、鎮(zhèn)痛與解熱作用(資古明，1989；黃真，2005)及保肝作用(伍昭龍，2006；鐘曉明，2006)。大鼠經(jīng)口急性毒性實(shí)驗(yàn)表明(江月仙，2005)，按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定，屬實(shí)際無毒；進(jìn)一步小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，說明三葉青未顯示有致突變性。臨床上主要用于抗癌及抗艾滋病毒、治療血液病與心腦血管疾病、肝炎、腦膜炎、急性支氣管炎、肺炎、腸炎及咽喉炎等感染性疾病，小兒外感高熱等(伍昭龍，2006)。

由于本種植物用途廣泛、藥效顯著，毫無節(jié)制地狂采濫挖，加上三葉青對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求苛刻，這種珍貴的草藥現(xiàn)已瀕臨滅絕。現(xiàn)有的三葉青野生資源根本難以滿足日益增長(zhǎng)的醫(yī)藥領(lǐng)域的需要。為了保護(hù)野生的三葉青資源，同時(shí)又能滿足醫(yī)藥工業(yè)的應(yīng)用，因此有必要建立三葉青的離體再生體系，這對(duì)豐富植物組織培養(yǎng)的理論和應(yīng)用生物技術(shù)保護(hù)種質(zhì)資源以及滿足臨床應(yīng)用等均有重要意義。

然而，由于野生三葉青對(duì)生境要求苛刻(須生長(zhǎng)在海拔700米的深山密林和懸崖峭壁的背陰面，上面要有散射光，旁邊要有細(xì)水滲出，下面要有樹葉覆蓋，常年氣溫保持在18℃左右)，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，黃酮類及酚類物質(zhì)含量高，非常容易褐化，導(dǎo)致常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù)十分難于對(duì)其進(jìn)行快繁。

迄今為止，在國(guó)內(nèi)外未見關(guān)于三葉青組織培養(yǎng)快繁成功的報(bào)道。我們通過大量試驗(yàn)，終于摸索出一套成熟的方法，成功實(shí)現(xiàn)了三葉青的組培快繁，可以快速培育出大量幼苗，為中藥材GAP種植提供一種切實(shí)可行的開發(fā)項(xiàng)目。

參考文獻(xiàn)：

1.丁鋼強(qiáng)，鄭軍獻(xiàn)，魏克民等.三葉青提取物對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2及原代大鼠肝細(xì)胞的體外毒作用研究.浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，17(9)：1-2

2.馮正權(quán)，倪克鋒，何煜等.三葉青黃酮誘導(dǎo)SGC-7901胃癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2006，11(6)：669-672

3.黃璐琦，李慧，陳京荔.珍稀瀕危中藥資源保護(hù)的相關(guān)問題探討.世界科學(xué)技術(shù)——中藥現(xiàn)代化，2001，3(6)：46-49

4.黃真，毛慶秋，魏佳平.三葉青提取物抗炎、鎮(zhèn)痛及解熱作用的實(shí)驗(yàn)研究.中國(guó)新藥雜志，2005，14(7)：861-864

5.江月仙，郭偉娣.三葉青的毒理學(xué)研究.中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2005，5(8)：774-776