[發(fā)明專利]細(xì)菌實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710070629.3
• 申請(qǐng)日: 2007-08-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101144775A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尚世強(qiáng);吳亦棟;趙正言
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/00
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/00;C12Q1/68;C12Q1/10
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種細(xì)菌實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)試劑盒，其特征是由PCR反應(yīng)液(1)、標(biāo)準(zhǔn)品(2)、陽(yáng)性對(duì)照品(3)、陰性對(duì)照品(4)、抽提裂解液(5)、操作說(shuō)明書(shū)(6)、包裝盒體(7)組成，包裝盒體(7)設(shè)有容器孔，分別放置PCR反應(yīng)液管(1)、標(biāo)準(zhǔn)品(2)、陽(yáng)性對(duì)照品(3)、陰性對(duì)照品(4)、抽提裂解液(5)，PCR反應(yīng)液(1)由單管分裝，矩陣排列，其中定量PCR反應(yīng)液含有PCR緩沖液、MgCl₂、dNTPs、細(xì)菌檢測(cè)用上游引物、檢測(cè)用下游引物、熒光探針、耐熱DNA聚合酶，其中：

上游引物序列為：5｀-CAACGCGAAGAACCTTACC-3｀

下游引物序列為：5′-ACGTCATCCCCACCTTCC-3′。

熒光探針序列為：5′-FAM-TAAGTCCCGCAACGAGCGCAA-TAMRA-3′。

標(biāo)準(zhǔn)品序列為：

CAACGCGAAG?AACCTTACCT?GGTCTTGACA?TCCACAGAAC?TTTCCAGAGA

TGGATTGGTG?CCTTCGGGAA?CTGTGAGACA?GGTGCTGCAT?GGCTGTCGTC

AGCTCGTGTT?GTGAAATGTT?GGGTTAAGTC?CCGCAACGAG?CGCAACCCTT

ATCCTTTGTT?GCCAGCGGTC?CGGCCGGGAA?CTCAAAGGAG?ACTGCCAGTG

ATAAACTGGA?GGAAGGTGGG??GATGACGT

抽提裂解液含有10mmol/L?Tri-HCl，pH7.6，5mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，0.5％十二烷基硫酸鈉；定量PCR反應(yīng)液必須用0.22μm膜過(guò)濾預(yù)處理。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)菌實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)試劑盒，其特征是：對(duì)照品分陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品，其中陰性對(duì)照為無(wú)菌注射用水樣品，陽(yáng)性對(duì)照為大腸埃希菌滅活DNA樣品。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細(xì)菌實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)細(xì)菌DNA中的應(yīng)用。