[發明專利]食物過敏原特異性IgG ELISA檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 200710070198.0
• 申請日: 2007-07-27
• 公開（公告）號: CN101109750A
• 公開（公告）日: 2008-01-23
• 發明（設計）人: 吳善東
• 申請（專利權）人: 杭州浙大生科生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/68
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 韓介梅

技術領域

本發明涉及了一種定量檢測人血清中食物過敏原特異性IgG的酶聯免疫吸附分析(ELISA)檢測試劑盒及其生產方法，篩查確定致敏食物過敏原及過敏反應程度。

背景技術

過敏性疾病是現代社會中最常見的一種疾病，它是由廣泛存在的過敏原引發的，我國大約有5-10％的人受過敏原侵擾。過敏反應(allergic?reaction)又稱變態反應，過敏原(allergen)又稱變應原。過敏反應有兩個主要類型：由IgE介導的速發型過敏反應，通常在接觸過敏原后短時間立即發生，病癥明顯；由IgG及其亞類IgG4介導的遲發型過敏反應，通常在接觸過敏原幾小時或幾天后才會出現反應癥狀，有長期疲勞、關節炎、蕁麻疹、濕疹、頭痛、腸胃功能失調及其它慢性癥狀。IgG介導的過敏反應，通常是由食物過敏原引發的，且患者皮試多呈陰性，迫切需要從眾多食物中篩查出引發過敏反應的過敏原，進而很好地對癥預防和治療(周光炎等譯，2002，免疫學，PP323-369，人民衛生出版社；Sampson?HA，1999，Food?allergy，part1，J?Allergy?ClinImmunol，103：717-728)。

過敏患者攝入食物過敏原后，體內產生的IgG抗體及其亞類與脫顆粒化的嗜堿性粒細胞及肥大巨細胞結合，活化互補的遞級細胞和組織，引發過敏反應；在過敏患者的血液中可檢測出IgG及其亞類濃度的升高(BrightonWD，1980，Frequency?of?occurrence?of?IgG(S-TS)，Clin?Allergy，10：97-100)。過敏患者再次攝入食物過敏原后，提高循環血液中特異性IgG濃度，已被為減輕過敏反應病癥而進行免疫治療患者的血清IgG濃度的檢測多次證實(Kemeny?DM?etal，1986，Subclass?of?IgG?in?allergic?disease，Clim?Allergy，16：571-574)。

根據近40年來的大量研究，食物過敏原分兩大類：植物蛋白和動物蛋白。由它們的結構和功能特性，含過敏原的植物蛋白的是豆科植物、樹堅果、谷物、水果、蔬菜等中的醇溶蛋白的超家族，花生、樹堅果、大豆等的種子貯藏蛋白的杯狀蛋白超家族和谷物的α-淀粉酶、蛋白酶抑制劑等植物防衛系統的蛋白家族(Breiteneder?H?er?al，2004，A?classification?of?plant?food?allergens，J?AllergyClim?Immunol，113：821-830)；含過敏原的動物蛋白的來源為哺乳動物的肉及乳蛋白，鳥類、魚、甲殼動物、軟體動物、兩棲動物和爬行動物等的肉蛋白，來源廣發、豐富；以它們為原料還生產了數不清的“營養健康食品”(WalJM，1999，Nahrung，43：s168-174)，迫切需要體外檢測食物過敏原。

過敏反應在臨床上可以通過皮膚試驗以及各種體外檢測方法，如放射性免疫分析(RIA)法、免疫印跡(IS)、免疫沉淀(IP)和酶聯免疫吸附分析(ELISA)法等，結合發病癥狀等來確定致敏的過敏原(Sampson?HA，1999，Foodallergy，part2，J?Allergy?Clin?Immunol，103：981-989)。ELISA方法較RIA、IS、IP等方法安全、簡單、經濟快速，是世界上當前發展最快且最常用的體外檢測致敏性過敏原及其過敏程度的方法(Yunginger?JW?er?al，2002，J?Allergy?ClinImmunol，105：1077-1084)。

ELISA試劑盒檢測食物中過敏原蛋白所需技術，如過敏原蛋白的提純方法，人IgG抗體的制備、純化，抗人IgG抗體生產提純，酶標記抗體的制備純化等均已成熟(Porstmann?T，kiessig?ST，1992，Enzyme?immunoassay?techniques，Anoverview，J?Immunol?Methods，150：5-21)為食物過敏原特異性IgG?ELISA檢測試劑盒的商品化生產建立了技術基礎，國外也已生產出了商品化體外檢測試劑盒，如Pharmacia公司(www.purduepharma.com)的immuno?CAP^TM?100?specificIgG?kit，Biomerica公司(www.biomerica.com)的Allerquant?IgG?food?allergyacreening?ELISA?kit等。

發明內容