[發(fā)明專利]乳鐵蛋白在制備防治人輪狀病毒所致疾病的藥物中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710070091.6
• 申請日: 2007-07-19
• 公開（公告）號: CN101130079A
• 公開（公告）日: 2008-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱婉萍;孔繁智;黃飛華;陳小囡
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省中醫(yī)藥研究院
• 主分類號: A61K39/40
• 分類號: A61K39/40;A61P31/14;A61P1/12
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 黃美娟;王兵

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及乳鐵蛋白在制備防治人輪狀病毒所致疾病的藥物中的應(yīng)用。

(二)背景技術(shù)

乳鐵蛋白(Lactoferrin，LF)1960年首先由Groves從牛乳中分離獲得，因與鐵結(jié)合而呈紅色，故稱之為“紅蛋白”。在發(fā)現(xiàn)之初，LF被認(rèn)為是一種與鐵的轉(zhuǎn)運和存儲有關(guān)的蛋白質(zhì)，所以又稱乳轉(zhuǎn)鐵蛋白。進(jìn)一步研究表明，LF是一種分子量為70～80kD的糖蛋白，廣泛存在于乳汁、唾液、淚液等外分泌液或血漿、中性粒細(xì)胞中。乳汁，尤其是初乳中LF的含量很高，如牛初乳中的LF質(zhì)量濃度為1g/L。深入研究發(fā)現(xiàn)，LF是一種具有多種生物學(xué)功能的蛋白質(zhì)，它不僅參與鐵的轉(zhuǎn)運，而且具有抗菌、抑菌、抗病毒、抗氧化、調(diào)節(jié)機體免疫和提高腸道對鐵離子的吸收等作用，被認(rèn)為是一種新型的抗菌、抗癌藥物和極具開發(fā)潛力的食品和飼料添加劑。

還有報道乳鐵蛋白具有抗病毒作用乳鐵蛋白通過抑制病毒進(jìn)入細(xì)胞，減輕對人體肝細(xì)胞的損害。肝細(xì)胞病毒C(HCV)是一種有囊膜的單鏈RNA病毒，它可以引起慢性肝炎、肝硬化、肝癌。LF可通過結(jié)合在肝細(xì)胞病毒C的囊膜蛋白上阻止病毒與靶細(xì)胞結(jié)合。但沒能報道以實驗表明LF對輪狀病毒有抑制或抵抗作用。

人輪狀病毒(HRV)是引起全世界嬰幼兒嚴(yán)重胃腸炎和脫水的最主要病因，幾乎所有兒童在出生后3～5年都感染過HRV。在發(fā)展中國家和發(fā)達(dá)國家中HRV感染情況相似，公共衛(wèi)生條件的改善不能夠減少輪狀病毒腹瀉的發(fā)病率。HRV感染是世界范圍的，幾乎每個兒童在5歲前都感染過HRV，在發(fā)展中國家和發(fā)達(dá)國家都是一個重要的健康和公共衛(wèi)生問題，因此迫切需要研制一種成本低廉、對HRV有較好防治效果，可大范圍推廣使用的藥物。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明既是為了提供一種成本低廉、對HRV有較好防治效果的物質(zhì)，為新藥篩選提供了基礎(chǔ)。

為達(dá)到發(fā)明目的本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提示：乳鐵蛋白在制備防治人輪狀病毒所致疾病的藥物中的應(yīng)用。

所述乳鐵蛋白的半數(shù)有效劑量為278.45±12.88μg/mL。藥物治療指數(shù)為17.98。

本發(fā)明通過實驗證明，乳鐵蛋白不僅具有直接抗人輪狀病毒的作用，還可提高細(xì)胞的抗人輪狀病毒作用，并且還具有抑制人輪狀病毒增殖的作用，另外也具有直接抗人輪狀病毒和提高細(xì)胞的抗人輪狀病毒的聯(lián)合作用。因此，乳鐵蛋白可用于制備抗人輪狀病毒的藥物、提高細(xì)胞抗人輪狀病毒作用的藥物中、以及抑制人輪狀病毒增殖的藥物，也可作為疫苗應(yīng)用于人輪狀病毒所致相關(guān)疾病的防疫。特別的，乳鐵蛋白可用于制備預(yù)防和治療人輪狀病毒引起的嬰幼兒腹瀉。

所述的藥物制成分散片時，每200片配方如下：乳鐵蛋白50g、微晶纖維素30g、甘露醇10g、PVPP?10g、PVP適量。

所述的藥物制成咀嚼片時，每1000片配方如下：乳鐵蛋白100g，甘露醇40g，聚唯酮10g，硬脂酸鎂適量。

本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：提供了一種來源廣泛、成本低廉、對HRV有較好防治效果的物質(zhì)，為新藥篩選提供了基礎(chǔ)。

(四)具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此：

實施例1：乳鐵蛋白抗人輪狀病毒作用

材料與方法：

1、細(xì)胞：采用MA-104細(xì)胞，在EagleMEM培養(yǎng)基營養(yǎng)液(0.05％谷氨酰胺，10％新生牛血清，雙抗)培養(yǎng)成單層，形態(tài)良好；

2、病毒：采用人輪狀病毒W(wǎng)a株，為浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物研究室保存株；

3、藥物：乳鐵蛋白：由浙江省中醫(yī)藥研究院提供，以EagleMEM培養(yǎng)基稀釋到實驗濃度；

4、病毒滴定：采用空斑滴定法；

5、乳鐵蛋白抗人輪狀病毒作用：采用不同濃度的乳鐵蛋白分別處理病毒、細(xì)胞和加入維持液，即直接抗病毒、提高細(xì)胞抗病毒能力和抑制病毒增殖三個作用環(huán)節(jié)，100空斑形成單位的人輪狀病毒經(jīng)10U/mL的胰蛋白酶(Sigma)37℃處理30分鐘，感染形態(tài)良好MA-104細(xì)胞單層，37℃吸附30分鐘，去除未吸附的病毒，加含1U/mL的胰蛋白酶的EagleM?E?M培養(yǎng)基維持液(0.05％谷氨酰胺，無新生牛血清，雙抗)，37℃培養(yǎng)48小時后，覆蓋含中性紅的EagleMEM培養(yǎng)基維持瓊脂，37℃培養(yǎng)48小時后計數(shù)病毒空斑；

6、藥物治療指數(shù)(TI)：按TI＝TD50/IC50進(jìn)行計算，TI值愈大，表明藥物的安全范圍愈大。

實驗結(jié)果：