[發(fā)明專(zhuān)利]一種生產(chǎn)5－氨基乙酰丙酸的工程菌及其構(gòu)建方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710068168.6
• 申請(qǐng)日: 2007-04-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101063104A
• 公開(kāi)（公告）日: 2007-10-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林建平;傅維琦;岑沛霖
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/21
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/21;C12N15/52;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 杭州求是專(zhuān)利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 韓介梅

1.一種生產(chǎn)5-氨基乙酰丙酸的工程菌，其特征在于此菌是含有類(lèi)球紅細(xì)菌的5-氨基乙酰丙酸合成酶基因的工程菌，中文名為大腸埃希氏菌，拉丁文學(xué)名為Escherichia?coli?Rosetta(DE3)-pET28a-R.S.hemA，在中國(guó)專(zhuān)利局指定的保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏編號(hào)為：CGMCCNo.1939。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)5-氨基乙酰丙酸的工程菌，其特征在于所說(shuō)的5-氨基乙酰丙酸合成酶基因核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)5-氨基乙酰丙酸的工程菌，其特征在于所說(shuō)的5-氨基乙酰丙酸合成酶氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列或在其基礎(chǔ)上減少、替代和增加一個(gè)氨基酸殘基的具有5-氨基乙酰丙酸合成酶活性的氨基酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)5-氨基乙酰丙酸的工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于包括以下步驟：

1)從類(lèi)球紅細(xì)菌的菌液中提取總基因組DNA；

2)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增出5-氨基乙酰丙酸合成酶基因；

3)將擴(kuò)增出的5-氨基乙酰丙酸合成酶基因與克隆載體pMD-18T?simple連接，進(jìn)行DNA測(cè)序，得到SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列；

4)將測(cè)序后的目的基因片斷與表達(dá)載體pET28a連接，構(gòu)建出重組子pET28a-R.S.hemA；

5)將重組子pET28a-R.S.hemA轉(zhuǎn)化至宿主菌中，即可。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的生產(chǎn)5-氨基乙酰丙酸的工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于所說(shuō)的宿主菌為大腸桿菌Rosetta(DE3)。