[發明專利]一種不同海區泥蚶的指紋鑒別方法

無效

• 申請號: 200710067705.5
• 申請日: 2007-03-19
• 公開（公告）號: CN101173892A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 李太武;蘇秀榕
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N21/25
• 分類號: G01N21/25;G01N27/447;G01N33/68;C12Q1/68
• 代理公司: 寧波海曙奧圣專利代理事務所
• 代理人: 程曉明

1.一種不同海區泥蚶的指紋鑒別方法，其特征在于由所述的泥蚶的消化腺組織的特異性蛋白和由所述的泥蚶的特異性的DNA序列來鑒別。

2.如權利要求1所述的一種不同海區泥蚶的指紋鑒別方法，其特征在于對所述的特異性蛋白用下述步驟進行標定：

a、取樣：隨機取所述的泥蚶的消化腺組織并稱重；

b、提取酶液：把所述的泥蚶的消化腺組織放入玻璃勻漿器中，然后加入重量是所述的泥蚶的消化腺組織的3倍的0.05％巰基乙醇水溶液，在冰浴條件下制成勻漿液；把所述的勻漿液放入溫度為4℃的冷凍離心機中，用12000rpm離心30min，取得上清液，即為酶液；

c、電泳：在所述的酶液中加入適量的溴酚蘭指示劑，然后用濃度7～7.5％的聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳時間為3h～5h；

d、顯色：將所述的聚丙烯酰胺凝膠置于染色液中，放在37℃恒溫箱中，在所述的聚丙烯酰胺凝膠上形成顯色的條帶，隨時觀察所述的條帶的顯色結果，至所述的條帶顯色清晰為止，然后用7.5％的乙酸固定所述的條帶，即為酶帶。

3.如權利要求2所述的一種不同海區泥蚶的指紋鑒別方法，其特征在于所述的特異性蛋白為蘋果酸脫氫酶，所述的染色液由NAD⁺16mg、NBT16mg、PMS?1.5mg、pH?7.0濃度為1M的蘋果酸鈉5ml、和pH?7.1濃度為0.5M的Tris-HCl溶液8ml混合配制，用蒸餾水定容至50ml。

4.如權利要求2所述的一種不同海區泥蚶的指紋鑒別方法，其特征在于所述的酶特異性蛋白為超氧化物岐化酶，所述的染色液由NBT22mg、V_B20.005g、Na₄-EDTA?12mg和pH8.0的0.05M的Tris-HCl溶液8ml混合配制，用蒸餾水定容至50ml。

5.如權利要求1所述的一種不同海區泥蚶的指紋鑒別方法，其特征在于對所述的特異性的DNA序列用下述步驟進行標定：

e、取樣：從所述的泥蚶中摘取肌肉組織，剪碎所述的肌肉組織；

f、提取DNA：用常規方法從剪碎的所述的肌肉組織中提取DNA；

g、PCR反應擴增：用特異性引物對提取的所述的DNA進行PCR反應擴增，得到所述的PCR反應擴增的產物；

h、電泳：用1％～1.5％的瓊酯糖凝膠對所述的PCR反應擴增的產物進行電泳10～20min，在所述的瓊酯糖凝膠中加入溴化乙錠，從所述的瓊酯糖凝膠中得到特異性譜帶；

i、測序：在所述的特異性譜帶上測定所述的泥蚶的特異性的DNA序列。

6.如權利要求5所述的一種不同海區泥蚶的指紋鑒別方法，其特征在于所述的特異性引物為

F：5’-GCTCTTCCCGCTTCACTCG-3’；

R：3’-GGGTCGATGAAGA?ACGCAG-5’。