[發(fā)明專利]鼠抗人酯多糖受體抗體輕鏈可變區(qū)基因及用途

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710066657.8
• 申請(qǐng)日: 2007-01-09
• 公開（公告）號(hào): CN101173284A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 湯永民;寧鉑濤;曹江
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/13
• 分類號(hào): C12N15/13;C07K16/28;A61K31/7088;A61K48/00;A61P35/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物技術(shù)，主要涉及鼠免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)基因，尤其涉及到鼠抗人酯多糖受體(國(guó)際命名CD14，抗體克隆名：ZCH-7-2F9)單克隆抗體輕鏈可變區(qū)基因及用途。

背景技術(shù)

血液系統(tǒng)腫瘤如白血病、淋巴瘤是嚴(yán)重危害人類健康的頑癥，化學(xué)治療(化療)仍然是當(dāng)前治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤的主要方法，但常規(guī)化療對(duì)腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的選擇性較差，因而毒副作用較大，且反復(fù)非根治性劑量的化療，又容易誘生腫瘤細(xì)胞的耐藥，最終，許多患者因耐藥腫瘤復(fù)發(fā)或大劑量化療致嚴(yán)重毒副作用如嚴(yán)重感染、出血、重要臟器功能衰竭等而告治療失敗。

與化療比較，單克隆抗體靶向治療具有良好的選擇性和特異性，它們只殺傷表達(dá)靶分子的細(xì)胞，而不損傷無靶分子表達(dá)的血細(xì)胞成分和組織器官細(xì)胞，從而可大大提高靶向治療的特異性，降低藥物的全身毒副作用。有效的靶向治療取決于良好的先導(dǎo)分子，系列特異性表面分化抗原單抗作為先導(dǎo)分子，將藥物或毒素特異地帶到腫瘤細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)，或通過完整抗體激活補(bǔ)體(CDC)或通過抗體介導(dǎo)細(xì)胞毒(ADCC)作用以達(dá)到殺滅白血病細(xì)胞的目的，有著無可替代的優(yōu)勢(shì)。目前，大多數(shù)高親和力的單抗屬于鼠源性的，用鼠源性單抗進(jìn)行臨床靶向治療可以發(fā)生嚴(yán)重的血清病或因產(chǎn)生人抗鼠免疫球蛋白(Ig)抗體(HAMA)而消除藥物的抗腫瘤作用等問題，限制了它們?cè)谂R床上的有效應(yīng)用。為了在臨床上能大量重復(fù)使用鼠源性單抗治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤，就必須最大限度地降低鼠源性單抗對(duì)人體的免疫原性。現(xiàn)知，抗體的免疫原性主要位于抗體恒定區(qū)(Fc)段，而識(shí)別抗原的部分(抗體的可變區(qū))則抗原性較弱。通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄈコ驣g的Fc段而保留可變區(qū)Fv段，可以大大降低鼠單抗的免疫原性而保留其識(shí)別抗原的特異性。人鼠嵌合型鼠抗人B淋巴細(xì)胞表面抗原CD20單抗是該技術(shù)的典型代表，其研制方法是采用人B淋巴細(xì)胞來免疫Balb/C純種小白鼠，然后通過鼠-鼠雜交瘤技術(shù)研制出抗人CD20單抗雜交瘤細(xì)胞株。通過對(duì)該雜交瘤細(xì)胞株編碼抗人CD20免疫球蛋白可變區(qū)肽鏈的信使核糖核苷酸(mRNA)的擴(kuò)增、克隆以及測(cè)序，并將編碼該抗體可變區(qū)基因與人免疫球蛋白恒定區(qū)基因進(jìn)行重組表達(dá)，制成嵌合型人鼠CD20抗體(可變區(qū)為鼠源性，恒定區(qū)為人源性的基因工程抗體)，使該抗體保留識(shí)別CD20抗原的特性，從而特異性地識(shí)別人B系淋巴細(xì)胞包括表達(dá)該抗原的所有淋巴瘤細(xì)胞、白血病細(xì)胞以及正常細(xì)胞，而消除了由鼠源性恒定區(qū)對(duì)人體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的缺點(diǎn)，從而起到有效的治療作用。該抗體的臨床應(yīng)用已經(jīng)使B細(xì)胞系腫瘤的治療進(jìn)入了一個(gè)嶄新的時(shí)代。要使一個(gè)鼠源性單抗能在臨床病人體內(nèi)反復(fù)使用的關(guān)鍵是鼠源性抗體的人源化基因改造，而人源化基因抗體研制的關(guān)鍵是該鼠源性抗體可變區(qū)基因的序列，因?yàn)榭贵w靶向作用的關(guān)鍵是該抗體的可變區(qū)，而編碼可變區(qū)基因序列是決定每一個(gè)單抗各自靶向作用的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供ZCH-7-2F9(CD14)鼠免疫球蛋白(單抗)輕鏈可變區(qū)基因，具有SEQ?ID?NO?1的核苷酸序列，及以該核苷酸序列為模板，翻譯成抗體輕鏈可變區(qū)蛋白或氨基酸序列SEQ?ID?NO?2。本發(fā)明提供的是鼠抗人酯多糖受體(國(guó)際命名CD14，抗體克隆名：ZCH-7-2F9)單克隆抗體輕鏈可變區(qū)基因。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供ZCH-7-2F9(CD14)鼠免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)基因在制備治療急性單核細(xì)胞性白血病藥物中的應(yīng)用。

采用單抗靶向治療某種特定血液腫瘤的基本條件是抗體必須能識(shí)別某種血液腫瘤細(xì)胞膜抗原。ZCH-7-2F9單抗具有良好的識(shí)別急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞膜CD14抗原而不識(shí)別其他組織、細(xì)胞成分的特性，體外實(shí)驗(yàn)表明，2F9免疫毒素對(duì)2F9陽性的急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞具有良好的選擇性殺傷作用，而對(duì)2F9陰性的細(xì)胞卻無作用，因此，該抗體具有潛在治療急性單核細(xì)胞性白血病的應(yīng)用前景。