[發明專利]一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法

無效

• 申請號: 200710066480.1
• 申請日: 2007-12-20
• 公開（公告）號: CN101180949A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發明（設計）人: 蘇有勇;孔祥瑩;昊楨芬;王督
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 徐玲菊

技術領域

本發明涉及一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法，屬于生物工程技術領域。

背景技術

石斛是我國傳統名貴中藥，分為鐵皮、黃草、金釵、霍山、環草、馬鞭等數十個品種，其中鐵皮石斛(Dendrobium?candidum?Wall.ex?Lindl)是石斛中的極品，主要分布于江南和西南各省。鐵皮石斛具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳等功能，用于熱病傷津、口干煩渴、病后虛熱等多種病癥。現代藥理學研究表明，鐵皮石斛所含的多糖具有抗腫瘤、抗衰老、增強人體免疫力和擴張血管等作用。鐵皮石斛多生懸崖峭壁上，由于種子極小、無胚乳，自然條件下萌發需與某些真菌共生，自然繁殖率低，且我國多年來對鐵皮石斛的采集量遠大于其生長量，由于長期采挖，自然資源枯竭，已瀕臨絕跡，被國家列為重點保護的野生藥材品種。為保護這一珍稀中藥品種，國內許多科研人員對鐵皮石斛進行了快速繁殖技術的研究，但大多研究集中在由野生種子萌發形成愈傷組織、原球莖，然后進行分化培養獲得再生苗。這些技術存在培育周期長、成本高等缺點。因此，如何縮短組培苗的培育周期，成為鐵皮石斛實現人工規模化栽培的關鍵。

發明內容

為克服現有技術存在的上述缺陷，本發明提供一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法。

本發明按以下技術方案完成：一種鐵皮石斛莖尖組培快速繁殖的育苗方法，其特征在于經過下列工藝步驟：

A、圓球莖誘導培養

選取健壯的野生鐵皮石斛苗，用其莖尖或芽尖作為外植體，先用流水沖洗干凈，再用70％的乙醇溶液消毒30～60秒，用無菌水沖洗一遍，把材料放入瓶子中，用濃度為0.1％的升汞浸泡6～10min，然后用無菌水沖洗4～5遍，接種于下列無菌誘導培養基中：B₅+KT1.5～2.0mg/L+NAA0.4～0.8mg/L+濃度為10～15％的香蕉汁，在溫度25-28℃、光照強度1800～2000lx、光照時間為12個小時的條件下，培養55～65天，即可形成圓球莖；

B、圓球莖增殖培養

將生長良好的圓球莖轉接入下列增殖培養基中：B₅+NAA1.5～2.0mg/L+KT0.8～1.0mg/L+濃度為10～15％的馬鈴薯汁，進行增殖培養，培養的環境條件為：溫度25-28℃，光照強度2000～2200lx，光照13小時，培養周期為35-45天；

C、圓球莖分化培養

將圓球莖轉入下列分化培養基中：B₅+NAA0.8～1.0mg/L+KT0.1～0.5mg/L+濃度為10～15％的香蕉汁，控制溫度25-28℃，光照強度2000～2200lx，光照時間12小時，培養55～65天，得到分化苗；

D、壯苗和生根培養

將分化苗轉入下列生根壯苗培養基中：B₅+NAA1.0～1.5mg/L+濃度為10～15％的香蕉汁，控制溫度25-28℃，光照強度1800～2000lx，光照時間12小時，培養35～45天，得到生根苗，即可出瓶煉苗、移栽。

本發明具有下列優點和積極效果：

(1)本發明縮短了鐵皮石斛苗的培育周期，從圓球莖至生根苗的培育周期僅為5～6個月，大大降低了生產成本。

(2)本發明采用莖尖組培技術培育的石斛苗，遺傳性狀穩定，其多糖和石斛生物堿含量與野生鐵皮石斛相近。

具體實施方式

以下結合具體實施例，對本發明做進一步描述。

實施例1