[發明專利]馬鈴薯脫毒薯苗無菌循環種質保存法

無效

• 申請號: 200710066365.4
• 申請日: 2007-11-08
• 公開（公告）號: CN101147468A
• 公開（公告）日: 2008-03-26
• 發明（設計）人: 郭華春;王瓊;龍雯虹;蔣從蓮
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;A01C1/00
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳左

技術領域

本發明涉及馬鈴薯種質資源的保存方法，特別是一種馬鈴薯脫毒薯苗無菌循環種質保存法。

背景技術

馬鈴薯是中國乃至世界上第四大作物，其安全生產關系到社會的穩定，而種質資源是農業生產的基礎。馬鈴薯是無性繁殖作物，其種植過程中易感染病毒并在來年的種植中傳遞下去，導致種性退化。莖尖組織培養能有效地脫毒，防止種性退化，所以保存脫毒馬鈴薯營養體就是對馬鈴薯種質資源的保存。在試管苗的長期保存中，隨著繼代次數的增加和延長，試管苗出現徒長、徑細弱、節間長、葉片小等問題。目前為克服上述問題，探討馬鈴薯種質資源的保存方式主要有：(1)在液氮中超低溫保存。發表于《甘肅農業科技》2006年第10期的“馬鈴薯莖尖超低溫保存研究”一文報道組織培養的莖段經處理后，放入液氮中保存，再恢復培養，成活率可達42.8％。(2)用化學試劑處理組培苗，延緩其生長以達保存的目的。發表于《農村科技》2006年第7期的“馬鈴薯試管苗保存技術”一文報道了培養基中加生長延緩劑B9，可延緩組培苗生長，保存期達145天，延長了繼代培養的間隔時間。發表于《湖南農業大學學報自然科學版》2005年第5期的“植物生長調節劑對馬鈴薯試管苗生長和保存的影響”一文報道，培養基中加4.80mg/L的多效唑PP333，試管苗保存的時間最長可達300天。另，發表于《山西農業大學學報自然科學版》2003年第2期的“縮節胺在馬鈴薯脫毒試管苗保存中的作用”一文也報道了縮節胺對馬鈴薯試管苗有一定的保存作用。以上兩種保存方式的不足之處是：第一種保存法需液氮貯存裝置，不便推廣應用。而第二種保存法一直需要光照，且繼代時間短要不斷轉接。

馬鈴薯莖尖脫毒組織培養技術和脫毒試管微型薯的誘導方法已為公知的成熟技術。試管微型薯成熟后，本身固有一定時期的休眠特性。

發明內容

本發明的目的是提出一種馬鈴薯脫毒薯苗無菌循環種質保存法，它在現有成熟的馬鈴薯莖尖脫毒組織培養技術和脫毒試管微型薯誘導方法的基礎上，采用試管微型薯和試管苗在無菌環境下循環保存，以達到用簡易設備，較之一般組織培養不需添加額外試劑的前提下，省時、省工地保存馬鈴薯種質資源，促進馬鈴薯種植業健康、持續發展。

本發明是這樣實現的：

一種馬鈴薯脫毒薯苗無菌循環種質保存法，用現有的莖尖組織培養技術獲得脫毒苗，經誘導得到試管微型薯，其特征在于：該試管微型薯轉入培養瓶中于3～5℃的低溫保存200～360天后取出，在溫度為20～25℃、光照為2000～4000勒克斯的條件下培養40～60天得到無菌苗，無菌苗在溫度為18～20℃條件下培養60-80天后得微型薯，重復上述操作，形成脫毒薯苗循環種質保存。

所述的微型薯轉入培養瓶前，對培養瓶按如下要求進行滅菌：剪1.0～2.0cm厚、大小相當的海綿墊于培養瓶底，蓋上瓶蓋，放于1.1kg/cm²的壓力下滅菌30～40分鐘。在無菌操作室將微型薯轉入經無菌處理的培養瓶中，每瓶裝5～10個試管微型薯。

裝有微型薯的培養瓶低溫保存取出后，向瓶內注入20～40mL已滅菌的MS液體培養基后，在上述溫度、光照條件下得到無菌苗。

在無菌操作室內，把20-40mL滅好菌的含有8％蔗糖的MS液體培養基注入裝有試管無菌苗的培養瓶中，然后將培養物放到溫度為18-20℃、黑暗的培養室中培養60-80天后誘導得微型薯。

本發明與現有技術相比具有如下優點：

1、不需復雜的設備。整個過程所需設備滅菌鍋、超凈工作臺及冰箱等為一般組培養室具備。

2、不添加生長調節劑，利于有機食品的生產。此保存方法充分利用馬鈴薯塊莖本身所固有的休眠特性，在低溫條件下保存，因此不需添加任何額外化學試劑，符合生態環保的要求。

3、低溫保存后的微型薯成活率高，且整個過程均為無菌操作，不會因培養物消毒不當造成污染，所以不易造成種質資源喪失。

4、保存周期長、操作簡單、省時、省工。微型薯在3～5℃的冰箱可保存6～12個月，培養試管苗需40～60天，誘導結薯要60～80天，累計保存一個周期長達480多天，而其間只用采收微型薯一次、加MS液體培養基一次，以及加含8％蔗糖的MS液體培養基一次，操作簡單、省時、省工。

具體實施方式

實施例1

1)、用公知技術對薯苗的轉心烏品種進行莖尖脫毒培養，并得到脫毒試管微型薯。