[發明專利]一種甘藍枯萎病的生防制劑及其制備方法和專用菌株

無效

• 申請號: 200710065264.5
• 申請日: 2007-04-09
• 公開（公告）號: CN101054566A
• 公開（公告）日: 2007-10-17
• 發明（設計）人: 裘季燕;劉偉成;劉建華;趙達;劉德文;劉霆;盧彩鴿
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;C12R1/125
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種甘藍枯萎病的生防制劑及其制備方法和專用菌株。

背景技術

植物病害是農業生產中重要的自然災害之一，其對全球農作物產量造成的損失達13-20％。真菌所引致的植物病害占所有植物病害的80％以上，許多重大病害對農業生產造成的損失慘重，如作物的白粉病、銹病、灰霉病、稻瘟病、枯萎病和疫病等。其中由鐮刀菌引致的蔬菜枯萎病，是一個具有潛在危險的流行病害，曾在新世紀初毀滅了北京的大興冬瓜專業村；鐮刀菌引起的黃瓜枯萎病的猖獗也使京郊黃瓜種植面積在近年減少了近2/3；同一類病原引起的甘藍枯萎病，也是由鐮刀菌侵染所致，這種病原菌可在土壤中長期存活，垂直分布可達80～100厘米深度，很難根除，并且正以每年面積擴大10倍的速度發展蔓延，為害嚴重的地塊造成了絕產。目前枯萎病的控制主要是通過化學農藥處理土壤或利用抗病品種來防治，但效果均不理想。土壤在使用化學農藥熏蒸消毒過程中，有益微生物群被殺死，破壞了土壤的微生物區系和微生態平衡。就甘藍枯萎病而言，目前尚無生產中理想的抗病品種，因此該病的防治主要依賴于化學農藥。長期大量應用化學農藥，不但污染環境、破壞生態平衡，而且也導致病原生物抗藥性的產生，致使病害再度猖獗且更難防治。微生物農藥源于自然，具有環境兼容性好、持效期長、低毒、對人畜和天敵安全等特點，同時其資源豐富，是植物尤其是果蔬病害控制的重要綠色環保途徑之一，符合可持續農業發展的要求。因此，近年微生物農藥在全球范圍內得到了迅速發展。

發明內容

本發明的目的是提供一株新的枯草芽孢桿菌，該菌株經過發酵培養后的菌劑和代謝產物對枯萎鐮刀病菌具有強烈的生長抑制作用，通過發酵培養的菌劑及無菌濾液可作為抗甘藍枯萎病的生防制劑，用于植物土傳真菌病害的生物防治。

本發明所提供的枯草芽孢桿菌，是枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)B03，該菌株已于2007年03月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市海淀區中關村北一條13號)，保藏號為CGMCCNo.1983。

枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)B03?CGMCC?No.1983，是從北京郊區種植蔬菜的土壤中分離得到的。具體方法如下：從北京郊區蔬菜田采集土樣，取10g加入內裝100ml無菌水和玻璃珠的三角瓶中，于100轉/min搖床上振蕩20min，取0.5ml加入4.5ml無菌水中，再依次稀釋10^-2，10^-3，10^-4倍，分別取各稀釋土壤懸液0.1ml在PDA平板上均勻涂布，超凈工作臺內吹至略干；每濃度3個重復，置于28℃恒溫箱中培養5-10天，挑取細菌單菌落進行稀釋劃線分離純化。以鐮刀枯萎菌等病原真菌為靶標菌，利用平板對峙培養法進行拮抗菌的初篩；對初篩獲得的有拮抗性的菌株進行搖瓶發酵培養，并分別獲得發酵菌液和發酵液經0.45μm的無菌微孔濾膜過濾除菌獲得無菌發酵濾液；進一步測試發酵菌液和無菌發酵濾液對病原菌菌絲生長、孢子萌發的抑制作用和溫室防病效果，最終篩選出性狀優良的生防菌株枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)B03?CGMCC?No.1983。

綜合枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)B03?CGMCC?No.1983的形態學特征和生理生化特性的結果，將其鑒定為枯草芽孢桿菌。具體鑒定結果如下：

(1)菌體的形態特征

革蘭氏染色陽性，細胞形狀為桿狀。

(2)生理生化特性

枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)B03?CGMCC?No.1983的生理生化特性如表1所示。

表1.枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)B03?CGMCC?No.1983的生理生化特性