[發明專利]一種飼用活菌酸制劑及其專用菌株

有效

• 申請號: 200710065017.5
• 申請日: 2007-03-30
• 公開（公告）號: CN101050442A
• 公開（公告）日: 2007-10-10
• 發明（設計）人: 朱元招;張德福;尚秀國;楊立彬;陸文清;石鳳云;王長彥;生廣旭;張藍庭;于維軍;蘇振剛
• 申請（專利權）人: 北京君德同創農牧科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/125
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種飼用活菌酸制劑及其專用菌株。

背景技術

隨著人民生活水平的提高和對環保意識的加強，對畜產品品質和動物飼養衛生環境的要求越來越高，傳統的飼用抗生素添加劑正在逐步被禁止或限制使用，2006年1月，歐盟已經正式決定禁止在畜禽飼料中添加促生長用的抗生素。隨后日本、韓國等亞洲發達國家也制定了相應的限制動物產品抗生素殘留的政策法規。

尋找抗生素替代物，減輕抗生素禁用對畜禽生產帶來的負面影響是各國畜牧業迫切需要解決的問題。國內外眾多報道認為，微生態制劑、酸化劑、中草藥飼料添加劑、飼用酶制劑、功能性寡糖等可作為抗生素的替代產品，但是由于養殖環境差，酸化劑添加劑量不夠，益生菌在腸道內活力不高，實際生產中往往不能完全取代促生長抗生素。復合幾種替代品，尋求高活力、耐逆境的微生態制劑，利用其抗菌肽的強大殺菌能力來替代抗生素目前仍然欠缺。

酸化劑、活菌制劑不能完全替代飼用抗生素。酸化劑在豬的應用效果顯著，尤其是對斷奶仔豬，能彌補胃酸分泌不足的缺陷，激活蛋白酶活性，促進營養物質消化吸收，可作為抗生素替代物的首選產品，但是作為替代品，添加量必需要大，受日糧的緩沖能力影響也較大，生產實踐中無法添加大劑量的酸化劑。益生素作為替代品，其劣勢在于活菌制劑易失活、不耐胃的酸性環境、難以在胃腸道菌群中處于競爭優勢。

由于受國情的約束，動物飼養的環境條件比較差，我國目前絕大部分的畜禽飼養還離不開抗生素，畜禽產品中抗生素殘留比較高，基本不能出口，嚴重制約了畜牧業的健康發展，所以開發生產能替代抗生素的高效安全飼料添加劑不僅可以提高畜禽品質，而且對于改善生態環境，實現畜牧業持續健康發展都是很有意義的。

發明內容

本發明的目的是提供一種飼用活菌酸制劑及其專用菌株。

本發明所提供的飼用活菌酸制劑的專用菌株是枯草芽孢桿菌枯草亞種(Bacillus?subtilis?subsp.subtilis)Gendone-01，已于2007年02月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市海淀區中關村北一條13號)，保藏登記號為CGMCC?No.1946。

枯草芽孢桿菌枯草亞種(Bacillus?subtilis?subsp.subtilis)Gendone-01CGMCC?No.1946，是從北京順義某養殖場土壤中分離得到的。具體方法如下：從北京順義某養殖場的不同地點取土壤12份，每個土樣均在2-3克左右。分別加入到100ml無菌生理鹽水中，振蕩混合1分鐘，然后靜置5分鐘。各取1ml上清液，分別加入到10ml無菌培養液A中(每升培養液A含有：葡萄糖5.0克、蛋白胨5.0克、牛肉膏3.0克、酵母粉1.0克、MgSO4·7H₂O?0.5克、MnSO4·H₂O?0.005克，pH?7.0)，同時各加入4種指示菌培養液各1ml(4種指示菌分別為：金黃色葡萄球菌Staphylococcus?aureusIVDC?C56005；鼠傷寒沙門氏菌Salmonella?typhimurium?IVDC?C79-13；大腸桿菌K88E.coli?IVDC?C83901；大腸桿菌K99E.coli?IVDC?C83529)。在37℃混合培養48小時(60rpm低速轉動)，然后將培養液置于80℃水浴中保溫10分鐘，殺死營養細胞。用無菌生理鹽水將處理后的培養液稀釋10000倍，取稀釋液0.5ml均勻涂布在固態培養基B(在培養液A中加入1.8％瓊脂)上，37℃靜置培養48小時，挑選其中最大的單菌落，轉接在斜面試管中，在4℃保存。最終篩選出性狀優良的枯草芽孢桿菌枯草亞種(Bacillus?subtilis?subsp.subtilis)，實驗室命名為：Gendone-01(保藏登記號：CGMCC?No.1946)。

綜合枯草芽孢桿菌枯草亞種(Bacillus?subtilis?subsp.subtilis)Gendone-01CGMCC?No.1946的形態特征、生理生化特性和16SrDNA序列分析的結果，將其鑒定為枯草芽孢桿菌枯草亞種(Bacillus?subtilis?subsp.subtilis)。具體鑒定結果如下：

(1)菌體的形態特征

革蘭氏染色陽性，細胞形狀為桿狀，細胞直徑小于等于1μm，形成芽孢，芽孢不膨大，芽孢非圓形，不形成伴孢晶體。

(2)生理生化特性