[發明專利]一種酶法制備15NL－苯丙氨酸的方法

無效

• 申請號: 200710064534.0
• 申請日: 2007-03-19
• 公開（公告）號: CN101270377A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發明（設計）人: 袁其朋;岳海燕;汪文川
• 申請（專利權）人: 北京化工大學
• 主分類號: C12P13/22
• 分類號: C12P13/22;C12R1/85
• 代理公司: 北京思海天達知識產權代理有限公司
• 代理人: 霍京華

1.?一種酶法制備¹⁵NL-苯丙氨酸的方法，通過發酵獲得含苯丙氨酸解氨酶的菌體，以¹⁵N-硫酸銨為標記氮源，與反式肉桂酸發生酶促反應，經分離純化獲得¹⁵NL-苯丙氨酸，未轉化的標記氮源進行回收；具體步驟和方法為：

A菌體的發酵培養

將含苯丙氨酸解氨酶的酵母菌株，25-30℃下固體培養基中培養20-30小時，然后置于種子培養基中，25-30℃下培養20-24小時，移至產酶培養基中，25-30℃下培養21-24小時，離心并用生理鹽水洗滌，獲得含苯丙氨酸解氨酶的菌體；

B轉化反應

將步驟A獲得的含苯丙氨酸解氨酶的菌體置于轉化反應液中，加入的量使反式肉桂酸與含苯丙氨酸解氨酶菌體的質量比為1∶2.5-4.0，所說的轉化反應液為含¹⁵N-硫酸銨0.5-0.6mol/l、氫氧化鈉1.0-1.2mol/l、反式肉桂酸質量百分含量為1.0-2.0％的溶液，25-30℃下轉化反應20-24小時；

C分離純化

將步驟B獲得的轉化產物混合物離心除菌后，用稀硫酸調pH至3.0-4.0，離心除沉淀，再用氫氧化鈉溶液調pH至5.5-6.5，經大孔吸附樹脂分離，去離子水洗脫，洗脫液用稀硫酸調pH至5.5，經旋轉蒸發后，加入無水乙醇，冷卻結晶，再經過濾，將晶體冷凍干燥獲得¹⁵NL-苯丙氨酸；

D氮源回收

將步驟C大孔吸附樹脂分離后的含¹⁵N-硫酸銨的混合溶液，與氫氧化鈉溶液反應，放出的氨氣用硫酸溶液收集，經蒸發和烘干獲得高純度的¹⁵N-硫酸銨。

2.?根據權利要求1的方法，其特征是：所說的含苯丙氨酸解氨酶的酵母菌株為粘紅酵母Rhodotorula?glutinis?2.102菌株。

3.?根據權利要求1或2的方法，其特征是：固體培養基的組份和含量為：質量百分含量1.5-2.5％的瓊脂，8-12°Be麥芽浸粉，其余為水。

4.根據權利要求1或2的方法，其特征是：種子培養基的組份和質量百分含量為：葡萄糖0.5-2.0％，蛋白胨0.5-2.0％，酵母膏0.5-2.0％，K₂HPO₄0.05-0.2％，NaCl?0.4-0.6％，其余為水。

5.根據權利要求1或2的方法，其特征是：產酶培養基的組份和質量百分含量為：葡萄糖0.5-2.0％，玉米漿2.0-5.0％，豆餅粉1.0-3.0％，NaCl0.4-0.6％，K₂HPO₄?0.05-0.2％，L-苯丙氨酸0.02-0.1％，用稀鹽酸調pH至5.5，其余為水。