[發明專利]一種蘇云金芽孢桿菌工程菌UV173A及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200710064494.X
• 申請日: 2007-03-16
• 公開（公告）號: CN101050449A
• 公開（公告）日: 2007-10-10
• 發明（設計）人: 張杰;王廣君;宋福平;黃大昉;李國勛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A01N63/02;A01P7/04;C12R1/07
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 張濤

技術領域：

本發明涉及一種生物工程菌，特別是涉及一種廣譜殺蟲活性的蘇云金芽孢桿菌工程菌及其制備方法。

背景技術：

蘇云金芽孢桿菌(Bacillus?thuringiensis，簡稱Bt)是一種分布極其廣泛的革蘭氏陽性細菌。在形成芽孢的同時，能產生由一種或幾種殺蟲晶體蛋白組成的伴孢晶體(parasporalcrystal)。這種殺蟲晶體蛋白(Insecticidal?Crystal?Proteins，ICPs)又稱δ-內毒素(delta-endotoxin)，對人畜無害，不污染環境，因而Bt在害蟲的生物防治中得到了最廣泛的應用。

迄今為止已有人從不同的Bt菌株中克隆了378種殺蟲晶體蛋白基因，根據殺蟲晶體蛋白氨基酸的同源性，可將他們分為53大類，分屬160種模式基因(http://www.biols.susx.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/)。其中，cry1類基因的表達產物對鱗翅目昆蟲有特異的殺蟲活性，其蛋白分子量為130～140kD，用胰蛋白酶處理可生成60kD的毒性核心片段(Whiteley，H.R.And?Schnepf，H.E.，The?molecular?biology?of?parasporal?crystalbody?formation?in?B.thuringiensis，Annu.Rev.Microbiol.，1986，40：549)，Cry1Ba蛋白對小菜蛾具高毒力。cry3A基因對鞘翅目昆蟲具有特異毒性，該基因編碼65kD的蛋白，可不依賴于芽孢萌發形成晶體，在昆蟲中腸液的作用下，被降解為55kD的毒性多肽(Krieg?A，HugerAM，Langenbruch?G?A，et?al.1983?Bacillus?thuringiensis?var.tenebrionis：ein?neuer?gegenuberlarven?von?Coleopteren?wirksamer?pathotyp.Z.Ang.Entomol.，96：500-508)。

國內外已有人利用生物工程的方法，構建了一些蘇云金芽孢桿菌工程菌。如美國Ecogen公司首次利用質粒結合轉移等細胞工程手段構建了含有cry3B和cry1Ca基因、對鱗翅目和鞘翅目害蟲有活性的Bt工程菌(Sick，A.et?al.1990.Nucleotide?sequence?of?acoleopteran-active?toxin?from?a?new?isolate?of?B.t.subsp.tolworth.Nucl?Acids?Res.18；Entwistle，P.F.，1993.An?Environmental?Biopesticide：Theory?and?Practice.Wiley?Chichester?Press.U.K.125-146.)。美國Mycogen(Frank.H.Gaertner.et?al.Bacillus?thuringiensis?isolate.US?Patent，NO.4910016.Mar.20，19907.)公司和Sandoz(Dimitri-Karamata.et?al.Insecticidal?hybrid?bacteriafrom?B.t.subsp.kustaki?and?B.t.subsp.tenebrionis.US?Patent?NO.4797279.Jan?10，1989.)公司用上述同樣的方法研制出MT104和B-18013，分別用于粉紋夜蛾、甜菜夜蛾和馬鈴薯甲蟲的防治。

目前世界上防治鱗翅目和鞘翅目害蟲所使用的Bt制劑殺蟲譜較窄、品種單一、害蟲易于產生抗性，而且已經發現在田間小菜蛾對商品化的Bt制劑產生了抗性，因此延緩害蟲抗性的產生、拓寬Bt制劑的殺蟲譜逐漸成為人們的研究重點(Tabashnik?B?E，1994.evaluationof?resistance?to?Bacillus?thuringiensis.Annu.Rev.Entomol..，39：47-79.)。