[發明專利]卵巢細胞微囊

無效

• 申請號: 200710063111.7
• 申請日: 2007-01-26
• 公開（公告）號: CN101229192A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發明（設計）人: 史小林;郭曉霞;許晴;翁靜;路欣;梁元晶
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學
• 主分類號: A61K35/54
• 分類號: A61K35/54;A61K8/98;A61K9/50;A61K47/36;A61P15/12;A61P43/00;A61Q19/00;C12N5/08
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王朋飛

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種卵巢細胞微囊。

背景技術

卵巢是女性重要的生殖內分泌器官，有明顯的年齡性變化。卵巢功能的衰退始于30歲，并于絕經期開始，卵巢功能迅速下降，雌激素分泌銳減(絕經后雌激素水平可比高峰期下降90％)，從而導致機體出現一系列器官功能紊亂現象，特別是與雌激素關系密切的心血管、骨骼、大腦和皮膚等，在絕經后容易發生疾病。隨著人類壽命的延長和生活水平的提高，人類生存的目標不僅是“活著”，而且要“活好”。因此臨床上使用激素替代療法糾正因卵巢功能衰退(卵巢早衰，更年期)造成的機體功能紊亂。激素替代療法能有效地預防因性激素分泌不足而引發的一些疾病(如骨質疏松、女性絕經后綜合征等)，但同時發現女性雌激素水平由于受下丘腦-腺垂體的調節，不僅有著明顯的周期性變化，而且還有明顯的個體差異，激素替代療法很難做到個體化。由于外源性雌激素在體內呈非生理性釋放，可產生一些較為嚴重的副反應，如增加心腦血管疾病的死亡率和乳腺癌、靜脈血栓等的發生率，因此，近年來對應用激素替代療法預防絕經前后婦女慢性病的方法出現了爭議。目前只有那些有絕經期癥狀和存在有與絕經相關的生活質量逆向改變的婦女，首選激素替代治療，并且使用最低的有效劑量和短療程治療。隨著器官移植技術的進一步成熟和完善，人們希望當機體性腺功能衰退時，進行異體性腺移植，將能還機體一個置身于自體神經內分泌調控之下，適合于宿主本身內分泌水平的有功能的器官。卵巢移植的目的是為卵巢早衰、雙側卵巢切除或絕經期婦女，提供一種內源性雌性激素。目前主要有卵巢自體移植、胚胎卵巢移植、同種異體移植。卵巢自體移植由于供體卵巢來源充足，無免疫排斥，手術操作簡單，臨床上主要用于卵巢原位發生病變需放化療的患者(卵巢組織冷凍用于自體異位移植已成為可能)。胚胎卵巢細胞有較強的分化能力，被移入異體內可生長發育至成熟，并有內分泌功能，而且還能接受上級器官-垂體激素的調控，雖然目前胚胎卵巢被認為是比較理想的供體，但仍存在排異反應和來源問題。同種異體移植可為供體來源提供又一渠道，但面臨的最大問題是免疫排斥反應。

微囊技術起源于20世紀60年代，是組織工程的一個分支，是將外源性的細胞或組織包埋在半透性人工膜中進行體內移植，目的是通過微囊的免疫隔離作用，提高移植物在異體的存活率。采用微囊包埋技術進行細胞固定和移植要求所制備的微囊需具有透過性，以保證囊內細胞分泌產生的特定因子可通過囊膜進入細胞外間隙。APA生物微膠囊被認為是較好的微囊制備材料，海藻酸鈉(ALG)是由海藻中提出的聚陰離子多糖，在多價陽離子如Ca²⁺存在時形成凝膠。多聚賴氨酸(PLL)是聚陽離子大分子，與ALG可形成大分子復合物。目前已有胰島細胞、多巴胺細胞、甲狀旁腺等分泌含氮類激素細胞的微囊包裹及移植實驗取得可喜研究進展的報道，提示內分泌腺是微囊技術的適應組織，也證實微囊技術具有廣泛的應用前景。但雌激素的合成與分泌具有特殊性與復雜性，即需要卵泡膜細胞和卵泡顆粒細胞共同協作完成，并受下丘腦-垂體-性腺軸的調控，呈周期性分泌。體外培養卵巢細胞是否能持續性分泌雌激素，應用微囊技術將卵巢細胞微囊化后是否能持續性分泌雌激素，以及移植入小鼠腹腔后是否能持續性分泌雌激素，同時是否能有效地預防機體各個生命必需器官的衰退(這是當前的激素替代療法無法解決的難題)，國內外尚未見報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種卵巢細胞微囊，實現補充體內性激素個性化；

本發明的另一個目的在于提供上述卵巢細胞微囊的制備方法及應用。

本發明的卵巢細胞微囊是應用海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉(APA)包裹卵巢細胞，制備成內含卵巢細胞的微囊。微囊中的卵巢細胞是卵巢組織去除卵細胞外的其余細胞，包括具有內分泌功能的卵巢顆粒細胞和卵泡膜細胞；未分化的卵巢內間充質細胞和結締組織細胞。

APA卵巢細胞微囊為圓球型，表面光滑透明。微囊膜屬于生物半透膜，能阻止大分子物質進入膜內，小分子物質、細胞因子、性激素、O₂、CO₂等可以自由通過微囊膜。

上述微囊內的卵巢細胞是取卵巢組織，剪碎后制備成細胞懸液，經體外增殖培養獲得。卵細胞在培養過程中自然去除。

本發明的卵巢細胞微囊的制備方法包括如下步驟：

1)將經體外增殖培養后的卵巢細胞消化后制成細胞懸液；

2)將步驟1)細胞懸液與1.5％(質量g/體積L)海藻酸鈉混合制成終密度為2×10⁶個/ml細胞懸液。