[發明專利]一種重組抗癌肽及其制備方法和其應用

無效

• 申請號: 200710062538.5
• 申請日: 2007-08-10
• 公開（公告）號: CN101153056A
• 公開（公告）日: 2008-04-02
• 發明（設計）人: 韓梅;溫進坤
• 申請（專利權）人: 河北醫科大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K38/10;A61P35/00
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司
• 代理人: 白海靜

技術領域

本發明涉及重組氨基酸及其制備方法和其應用，具體地說是涉及一種重組多肽及其制備方法和其應用。

背景技術

隨著腫瘤分子學及肽組合化學的迅速發展，肽及肽的衍生物在腫瘤治療中的作用成為人們研究的熱點。目前人們已從海洋生物中分離出許多具有抗癌活性的小分子肽或環肽。如美國亞利桑那州癌癥研究所Pettir等從Dolabellaauriculara海兔中分離出一系列具有抗癌活性的小分子肽(dolastatins1--15)(詳見Pettit?GR，Kamano?Y，Herald?L?L.et?al.The?isolation?and?structure?of?a?remarkablemarine?animal?antmeoplastic?consrituent.J?Am?Chem?Soc.1987，109(22)：6883-6885；文獻1-3)；Rinerhart等從加勒比海的海鞘(Caribbean?tunicates)中分離出五種具有抗癌活性的環肽didemninA、B、C、D、E(詳見Rinehart?KL?Jr，Gloer?JB，CookJC.et?al.Structure?of?the?didemnins，antiviral?and?cytotoxic?depsipeptides?from?aCaribbean?tunicate.J?Am?Chem?Soc，1981，103(7)：1857-1859)。不過令人遺憾的是，目前所分離的肽類物質其含量甚低，且合成困難，由此嚴重制約了其在制備抗癌藥物中的應用。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種重組的抗癌肽。

本發明的目的之二是提供一種該抗癌肽的制備方法。

本發明的目的之三是提供一種含有該抗癌肽的表達載體。

本發明的目的之四是提供該抗癌肽在制備抗癌藥物中的應用。

本發明的目的是這樣實現的：

本發明所提供的重組抗癌肽，簡稱重組十三肽，其氨基酸序列為Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Val-Val-Tyr-Gly-Leu-Arg-Ser-Lys(SEQ?ID?NO.1)。

本發明所述的重組抗癌肽的制備方法包括以下步驟：

a、用質粒pTWIN2載體，經內切酶BspQ?I處理后，插入粘性末端的含有OPN的RGD序列的十三肽，在設計引物時加上了半胱氨酸TGC，經過引物變性、退火的方法使引物與酶切處理后的載體按1∶10(摩爾比)16℃連接過夜，得到重組質粒pTWIN2-RGD。

b、將重組質粒經大腸桿菌消化，轉入大腸菌或大腸埃希菌，誘導、收集、純化目的蛋白。

在表達載體中插入本發明克隆的抗癌肽并且導入宿主細胞如大腸菌或大腸埃希菌表達重組十三肽。

本發明抗癌肽是屬小分子環狀小肽，具有顯著的抑制腫瘤細胞侵襲和轉移的作用，同時便于人工合成，易于產業化。因此本發明抗癌肽可在制備抗癌藥物中得到應用。尤其適用于制備治療腸癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌或肺癌藥物。

本發明抗癌肽或含有該抗癌肽的表達載體經5.7mol/L鹽酸水解16小時，通過氨基酸自動分析儀及氨基酸序列儀即可測定出其序列。

本發明抗癌肽在用于制備抗癌藥物時，可以抗癌肽為藥物活性成分，并與藥學上可以接受的載體如生理鹽水、注射液、乳劑(如甘油三酯乳劑、水包油/油包水乳劑)或藥用常規輔劑如賦形劑、崩解劑、黏合劑、潤滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、芳香劑、表面活性劑等混合，按照常規的制劑技術將其制成注射液、輸液劑、緩控釋劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑等藥物劑型。

本發明抗癌肽可采用口服給藥，也可采用注射等非口服途經給藥。給藥劑量可以是1ng-10g/kg，具體給藥劑量可依據不同的給藥方式適時調整。醫師也可依據病情，酌情確定。

附圖說明

圖1是pTWIN2載體圖譜。

具體實施方式

下面的實施例、試驗實施例和制劑實施例可更詳細地說明本發明，但不以任何形式限制本發明。

實施例1本發明抗癌肽的重組、鑒定、純化與收集。

利用NEB(New?England?Biolabs)公司的IMPACT-TWIN系統，通過幾丁質珠親和層析及內含肽(intein)自剪接功能實現重組環狀小肽的制備。

一、構建重組質粒pTWIN2-RGD

pTWIN2載體圖譜，如圖1所示。

pTWIN2載體部分序列如下：

Polylinker?Region：pTW?IN2