[發(fā)明專利]一種山楂精降脂膠囊含量測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710061588.1
• 申請(qǐng)日: 2007-03-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101264147A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓桂茹;趙志軍;張文臣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 張文臣
• 主分類號(hào): A61K36/734
• 分類號(hào): A61K36/734;A61K9/48;A61P3/06;G01N21/25;G01N21/31
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種山楂精降脂膠囊含量測(cè)定方法。

背景技術(shù)

山楂精降脂膠囊為山楂精降脂片的改劑型品種，原山楂精降脂片為中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)第9冊(cè)收載的品種，由山楂水解提取物組成，具降血脂作用。原標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下收載的含量測(cè)定方法是：以槲皮素為對(duì)照，通過(guò)與亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液顯色后，采用分光光度法，在510nm處測(cè)定總黃酮含量。但在實(shí)際測(cè)定中發(fā)現(xiàn)，原測(cè)定方法，測(cè)定依據(jù)不合理，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)定供試品的含量。其理由有3點(diǎn)，(1)槲皮素對(duì)照品溶液顯色后，在510nm處無(wú)吸收，而供試品溶液有吸收，但吸收峰在480nm處。以無(wú)吸收峰的做對(duì)照，測(cè)定有吸收峰的含量，測(cè)定的結(jié)果是沒(méi)有任何參考價(jià)值的(見(jiàn)圖1、2、3、4)。(2)510nm是紫紅色的吸收區(qū)，樣品和對(duì)照品加堿后，樣品為紫紅色的，對(duì)照品為黃色的，在可見(jiàn)光區(qū)，以黃色做對(duì)照，測(cè)定紫紅色，從另一方面又說(shuō)明了方法的欠科學(xué)性。(3)原含量測(cè)定方法樣品是以乙醇為提取溶劑，取2.0ml置10ml量瓶中，加水及水系顯色試劑至刻度，脂溶性成分析出，溶液變渾濁，影響吸收度。所以說(shuō)原測(cè)定方法，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)定供試品的含量。

發(fā)明內(nèi)容

通過(guò)對(duì)提取溶劑、顯色條件、測(cè)定波長(zhǎng)的探討研究，提供一種以槲皮素為指標(biāo)，316nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，低濃度乙醇為樣品提取溶劑，測(cè)定總黃酮的科學(xué)、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、靈敏度高的含量測(cè)定方法。解決了原測(cè)定方法，槲皮素對(duì)照品吸收度不隨濃度成比例增長(zhǎng)，只能達(dá)到0.56的弊端，使其吸收度落在方法學(xué)規(guī)定的范圍之內(nèi)；線性相關(guān)系數(shù)由原方法γ＝0.9723，提高到γ＝0.9997；加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：回收率為99.75％(見(jiàn)附表1)。方法的靈敏度是原方法的5倍以上。

準(zhǔn)確測(cè)定方法提供了正確的含量限度，由原方法規(guī)定的毫無(wú)根據(jù)的每片或粒不得低于4.5mg，修訂為不得低于0.90mg。真正起到了科學(xué)、準(zhǔn)確控制制劑質(zhì)量的作用。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為：

1.對(duì)照品溶液的制備精密稱取在干燥器中干燥24小時(shí)的槲皮素適量，加乙醇配置成原液，再取一定量原液，加30～60％的乙醇稀釋成每ml含槲皮素0.03～0.07mg的溶液；

2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0ml分別置25ml量瓶中，依次加30～60％乙醇使總量為5ml，搖勻，依次加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，再分別加10％的硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，分別加入氫氧化鈉試液10ml，加30～60％乙醇至刻度，搖勻，避光放置15分鐘，以相應(yīng)的溶劑和試劑為隨行空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VB)，迅速在316±2nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程；

3.測(cè)定法取樣品10粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取0.03～0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加30～60％乙醇25～50ml，密塞，稱定重量，回流10～30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，再用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1～5.0ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自加“加30～60％乙醇使總量為5ml”起，依法測(cè)定吸收度，用回歸方程，計(jì)算供試品中槲皮素的含量。

本發(fā)明的原理如下：

以槲皮素為對(duì)照，通過(guò)與亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液顯色后，槲皮素對(duì)照品與供試品溶液在316±2nm處都有吸收峰，而且其含量與吸收強(qiáng)度符合比爾定律。

本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)及有益效果如下：

(1)首次發(fā)現(xiàn)與亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液顯色的槲皮素與總黃酮其共有吸收峰在316±2nm處，并非文獻(xiàn)報(bào)道的510nm處。

(2)以低濃度乙醇取代乙醇作為樣品的提取溶劑，解決了原方法樣品溶液加水及水系顯色試劑后，溶液變渾濁，影響吸收度，使原方法失去準(zhǔn)確性的弊端。

(3)檢測(cè)波長(zhǎng)和提取溶劑的改進(jìn)，有效提高了方法的準(zhǔn)確性、靈敏度、重現(xiàn)性和線性范圍。徹底解決了原測(cè)定方法，槲皮素對(duì)照品含量不隨濃度成比例增長(zhǎng)的弊端(其吸收度在0.196～0.56)，使其吸收度落在方法學(xué)規(guī)定的范圍之內(nèi)；線性相關(guān)系數(shù)由γ＝0.9723(見(jiàn)附表2、圖5)，提高到γ＝0.9997(見(jiàn)附表3、圖6)；方法的靈敏度是原方法的5倍以上。

(4)提取方式由原方法的索氏提取3小時(shí)，改為回流10分鐘，縮短了時(shí)間，節(jié)約了試劑，提高了效率。