[發(fā)明專(zhuān)利]運(yùn)用復(fù)合熒光PCR技術(shù)檢測(cè)食源性病原微生物的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710057579.5
• 申請(qǐng)日: 2007-06-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101113472A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張宏偉;黃熙泰;于佳;鄭文杰;劉寅;唐丹舟;魏亞?wèn)|;李永君;葉露萌
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心;南開(kāi)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;G01N33/52
• 代理公司: 天津市鼎和專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 李鳳

1.一種運(yùn)用復(fù)合熒光PCR技術(shù)檢測(cè)食源性病原微生物的方法，其特征在于，所使用的引物組序列如下：

引物：

引物序列一：5’TTTCTGACATAAGAAATACAAATAATCATA

引物序列二：5’GTTTTGAATGTTTGTTCATTCAAATTAAT

引物序列三：5’TGGTGGAGCCTAGCGGGATC

引物序列四：5’CCGTGTACGCTTAGTCGCTTAACCTC

引物序列五：5’GCTCTTTAACAATTTGGAAAGCTGA

引物序列六：5’TTCCCAAGAACACTTGAATGTGTT。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)用復(fù)合熒光PCR技術(shù)檢測(cè)食源性病原微生物的方法，其特征在于，PCR反應(yīng)體系中各組分構(gòu)成比例如下：

成分????????????????濃度??????????加樣量

PCR體系預(yù)混合物?????2倍???????????12.5μL

引物序列一：????????10μmol/L?????0.3μL

引物序列二：????????10μmol/L?????0.3μL

引物序列三：????????10μmol/L?????0.6μL

引物序列四：????????10μmol/L?????0.3μL

引物序列五：????????10μmol/L?????0.3μL

引物序列六：????????10μmol/L?????0.6μL

DNA樣品???????????????????????????1μL

雙蒸水????????????????????????????9.1μL

總體積????????????????????????????25μL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)用復(fù)合熒光PCR技術(shù)檢測(cè)食源性病原微生物的方法，其特征在于，熒光PCR擴(kuò)增程序及測(cè)定擴(kuò)增片段的熔解溫度程序?yàn)椋?/p>

(1)95℃??10分鐘；

(2)95℃??15秒；

(3)65℃??30秒；

(4)回到第(2)步，重復(fù)40次；

(5)95℃??2分；

(6)梯度升溫60℃至95℃每秒上升0.2℃。

4.權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)用復(fù)合熒光PCR技術(shù)在檢測(cè)食源性病原微生物方面的應(yīng)用。