[發(fā)明專利]動物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710056432.4
• 申請日: 2007-01-11
• 公開（公告）號: CN101221172A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王碩;張鴻雁;鄭文杰;張燕;王磊
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科技大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N1/34;G01N21/31
• 代理公司: 天津盛理知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王來佳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品檢測分析技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種動物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

磺胺類藥物的基本結(jié)構(gòu)為對氨苯磺酰胺，具有芳氨基和磺酰胺基，多為兩性化合物，藥物具有一定酸性。磺胺類藥物的抑菌作用是由于磺胺類藥物中能分解出對氨基苯磺酰胺，其分子的大小和形狀與組成葉酸中的對氨基苯甲酸相近，化學性質(zhì)也類似。由于細菌對二者缺乏選擇性，大量的對氨基苯磺胺替代了對氨基苯甲酸而被細菌吸收，干擾細菌葉酸的合成而影響其生長繁殖，從而可抑制大多數(shù)革蘭氏陽性菌和某些陰性菌。磺胺類藥物應(yīng)用較廣，具有一定療效的就有幾十種。在食源性動物的飼養(yǎng)中，磺胺類藥物作為獸藥被廣泛用于獸醫(yī)臨床對細菌感染性疾病的防治。這類藥物具有顯著的毒性副作用，通過任何途徑攝入都會在人體中蓄積，并可引起泌尿系統(tǒng)的損害，特別是在體內(nèi)形成的乙酰化磺胺在酸性尿中溶解度很低，可在腎小管、腎盂、輸尿管等處析出結(jié)晶，損害腎臟。磺胺類藥物具有抗原性，刺激機體內(nèi)抗體的形成，造成過敏反應(yīng)，表現(xiàn)在皮炎，白細胞減少，溶血性貧血和藥熱。有資料表明，磺胺二甲嘧啶等一些磺胺類藥物在連續(xù)給藥中能夠誘發(fā)嚙齒動物甲狀腺增生，具有潛在的致癌性。還可導致許多細菌產(chǎn)生抗藥性，引起耐藥菌株的增加。如果這類藥物不按規(guī)定或要求使用與停藥，動物體內(nèi)的藥物殘留會隨著食物鏈影響人體的健康，因此，歐盟、加拿大和美國規(guī)定所有磺胺類藥物在可食組織和奶中總量的最高殘留限量為100μg/kg，而日本規(guī)定為20μg/kg，并且具有逐步嚴格控制的發(fā)展趨勢。長期食用有這些藥物殘留的動物性食品可能有害健康，引起慢性中毒。因此，各國政府對磺胺類藥物在動物性食品中使用嚴格規(guī)定了MRL或ADI。2002年12月我國農(nóng)業(yè)部公告第235號文規(guī)定在所有食品動物的肌肉、脂肪、肝和腎中最高殘留限量為100μg/kg，并將其列為獸藥殘留監(jiān)控的重點。

目前，針對磺胺類獸藥殘留的檢測方法有薄層色譜法(TLC)、高壓液相色譜(HPLC)法、液質(zhì)聯(lián)用(HPLC/MS)、氣相色譜法(GC)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和毛細管電泳法(HPCE)等。由于復雜的儀器設(shè)備和繁瑣的前處理過程，儀器分析方法不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本的篩選，其中ELISA方法作為一種新型的動物源性食品中磺胺類藥物殘留篩選方法已被使用，如中國專利申請(200510086777)，該方法與儀器分析技術(shù)相比雖然具有快速、簡便的特點，但是它采用的是單克隆抗體及二抗酶技術(shù)和間接競爭免疫檢測方法，在二抗酶技術(shù)中，二抗-酶與一抗結(jié)合反應(yīng)、位點交叉問題，易引起非特異性結(jié)合，導致結(jié)合偏差致使靈敏度較差，而間接競爭免疫檢測方法穩(wěn)定性較差。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種具有特異、靈敏、準確、快速、方便、廉價的動物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測試劑盒及其檢測方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

一種動物源性食品中磺胺類藥物多殘留檢測試劑盒，由盒體、包被板以及托架構(gòu)成，包被板和托架固裝在盒體內(nèi)，其特征在于：該托架上設(shè)置有：

(1)磺胺類藥物標準溶液凹孔：其磺胺類藥物標準溶液濃度為8～12mg/L，使用時用稀釋液稀釋至90～105μg/L后，再按1∶3稀釋六個梯度；

(2)酶標記的磺胺類藥物抗原工作液凹孔：其酶標記的磺胺類藥物抗原工作液使用時用酶標記的磺胺類藥物抗原稀釋液按1∶200倍稀釋；

(3)酶標記的磺胺類藥物抗原稀釋液凹孔：其酶標記的磺胺類藥物抗原稀釋液為磷酸鹽緩沖溶液，pH?7.4，使用時用二次水按1∶5稀釋；

(4)底物顯色劑A液凹孔：其底物顯色劑A液為含過氧化氫脲的醋酸鈉緩沖液；

(5)底物顯色劑B液凹孔：其底物顯色劑B液為含3，3′，5，5′-四甲基對二氨基聯(lián)苯(TMB)的二甲基亞砜溶液；

(6)終止液凹孔：其終止液為1.25mol/L?H₂SO₄；

(7)濃縮洗滌液凹孔：其濃縮洗滌液為1％吐溫的磷酸鹽緩沖液。

而且，所述的包被板為96孔抗磺胺類藥物多克隆抗體預(yù)包被板，并且其由微孔條組成，其制備是由含多抗的磷酸鹽緩沖液(pH?9.6)，包被22～26小時，加入封閉液封閉、凍干、真空包裝。

而且，所述的封閉液為含牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液。

而且，所述的多克隆抗體是選用雌性大白兔進行五次免疫后，由兔子的耳緣靜脈采集血液進行效價檢測，并離心獲得抗血清，使用G-Sepharose蛋白親和層析柱對抗血清進行純化。