[發(fā)明專利]檢測誘騙受體3的雙抗體夾心ELISA方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710055758.5
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號: CN101135686A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬忠森;王秀麗;鄭永晨;吳春風(fēng);楊洋;吳艷峰;尹金植;楊俊玲;任錦;安繼紅;赫國志
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/541;G01N33/574;G01N33/531
• 代理公司: 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 陳宏偉

1.一種檢測誘騙受體3的雙抗體夾心ELISA方法，其特征在于：

以純化的多克隆抗體為捕捉抗體，以生物素化的單克隆抗體為檢測抗體，建立檢測可溶性DcR3含量的雙抗體夾心ELISA法。

2.誘騙受體3基因的構(gòu)建及蛋白制備工藝，其特征在于：

應(yīng)用重疊PCR方法獲得DcR3基因，構(gòu)建的pET28a(+)/DcR3重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21菌株，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)His-DcR3融合蛋白，鎳柱親和層析純化目的蛋白，SDS-PAGE及Western?blot分析表達(dá)產(chǎn)物。

3.抗人誘騙受體3單克隆抗體的制備工藝，包括以下步驟：

采用純化的His-DcR3融合蛋白免疫BALB/c鼠，共腹腔免疫四次，待小鼠血清抗體達(dá)理想效價時，取免疫的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞和SP2/0骨髓瘤細(xì)胞在PEG4000作用下進(jìn)行融合，以HAT培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)，間接ELISA法篩選陽性孔，將有限稀釋法克隆后的雜交瘤細(xì)胞接種入小鼠腹腔產(chǎn)生腹水，收集的腹水經(jīng)過預(yù)處理后采用辛酸-飽和硫酸銨沉淀法、ProteinA親和層析法進(jìn)行純化，制備單克隆抗體。

4.抗人誘騙受體3多克隆抗體的制備工藝，其特征在于：

采用高純度的His-DcR3融合蛋白免疫家兔，制備并純化兔血清，制備多克隆抗體。