[發明專利]七葉樹總皂苷制備方法及其抗肥胖作用

無效

• 申請號: 200710055528.9
• 申請日: 2007-04-17
• 公開（公告）號: CN101239082A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: 鄭毅男;韓立坤;王丹輝;胡蔣寧
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P3/04;A23L1/30;A61K131/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明公開一種七葉樹總皂苷的制備方法及在預防和治療肥胖的醫藥品和保健食品中的應用，屬于中藥有效成分提取技術領域。

背景技術

《本草綱目拾遺》記載；″娑羅樹出西番海中…秋后結實如栗可食，正所謂七葉樹也″。本發明所述的七葉樹種子為七葉樹科植物日本七葉樹(Aesculus?Turbinata?Blume.)的干燥成熟種子。本發明所涉及的七葉樹種子總皂苷藥效，目前臨床上主要用于腦水腫、創傷性肢體腫脹、靜脈炎等疾病的輔助治療。七葉皂苷藥理作用可靠，臨床用途廣泛，不良反應少，尤其在抗滲出、消腫脹、對機體保護作用等方面發揮著重要作用。此外，該藥在治療腰椎間盤突出癥、流行性乙型腦炎、視網膜炎、腎病綜合征、腹瀉、周圍神經性疾病等方面也有研究報道。但是經檢索未見有七葉皂苷抗肥胖作用的報道。目前，世界肥胖人口日益增加，肥胖對人們的健康影響十分嚴重，容易引發高脂血癥、動脈粥樣硬化、冠心病、高血壓、糖尿病等一系列疾病。本發明所述七葉皂苷的抗肥胖作用對開發抗肥胖藥物及保健食品具有十分現實的意義。

發明內容

本發明提供了日本七葉樹種子總皂苷提取物的制備方法，適用于工業化生產。

本發明公開了日本七葉樹總皂苷提取物預防及治療肥胖的用途。

本發明中日本七葉樹種子提取物的提取方法包括以下步驟：

干燥的日本七葉樹種子粗粉5kg用80％乙醇20L浸泡過夜，超聲波室溫條件下提取30min，過濾，重復三次，合并濾液，減壓濃縮，得到80％乙醇提取物，水溶，過大孔樹脂D101柱，依次用水、80％乙醇洗脫。乙醇溶液減壓濃縮，真空干燥，得七葉總皂苷400g。七葉總皂苷用Zorbax?Columns?C₁₈高效液相色譜儀半制備柱經制備、分離、純化得化合物1和2，經鑒定分別為化合物七葉皂苷1b、七葉皂苷IIa。

實驗例1

胰脂肪酶活性的測定

1實驗材料與方法

1.1材料：

[3H]三油酸甘油酯購于日本東京Amersham公司；胰脂肪酶購自Sigma公司。七葉樹總皂苷由本室提供。

1.2實驗方法：

從三油酸甘油酯釋放油酸的量來判定酶的活性。90μmol/L三油酸甘油酯，12.6μmol/L卵磷脂，9.45μmol/L牛磺膽酸置于9mL的0.1mol/LN-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)，pH7.0，含有0.1mol/LNaCl，超聲波處理5min。測定溶液總體積200μL含有下列物質：50μL七葉總皂苷，50μL胰脂肪酶，0.5μmol/L三油酸甘油酯，0.053μmol/L牛磺酸，0.07μmol/L卵磷脂，20μmol/L?TES，20μmol/LNaCl，于37℃，pH7.0的條件孵化30min。釋放油酸的測定按Belfrage^[1]的方法進行測定。

2數據的統計學處理

所有數據以X±Sx來表示。用t檢驗進行顯著性檢驗。

3結果

七葉皂苷對胰脂肪酶的作用顯著，隨著劑量的增加對胰脂肪酶的抑制作用越顯著，在2.0g.L^-1其活性只有2.3％(見表1-1、附圖1、附圖3)

表1-1七葉皂苷對胰脂肪酶的作用

N＝4

4結論

七葉皂苷在體外對胰脂肪酶活性有非常顯著的抑制作用，在2.0g.L^-1時胰脂肪酶活性只有2.3％。

實驗例2

小鼠排泄物中三酰甘油含量的測定

1實驗材料與方法

1.1材料：

實驗動物，3周齡的ICR系雌性小鼠購自于大販CLEA公司，購買后置于室溫25±1℃，相對濕度60％的室內并且明暗12h循環適應1周，供試驗。預備飼養期間，自由采食和飲水。七葉樹總皂苷由本室提供。

1.2實驗方法：

將ICR系雌性小鼠分成5組，每組12只，分別食普通飼料、高脂肪飼料、高脂肪飼料+0.35％七葉總皂苷、高脂肪飼料+1％七葉總皂苷、高脂肪飼料+2％七葉總皂苷。3天后測定小鼠排泄物中三酰甘油含量，用和光三酰甘油酯E-試劑盒方法測定。

2數據的統計學處理

所有數據以X±Sx來表示。用t檢驗進行顯著性檢驗。

3結果

3天后與對照組相比，食用高脂肪組的小鼠其糞重降到0.14±0.035g，食用高脂肪食物+0.35％、1％、2％七葉皂苷，其糞重和糞中三酰甘油含量都比高脂肪組小鼠有所增加，2％七葉皂苷組作用顯著(見表2-1)。