[發明專利]一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法

無效

• 申請號: 200710055462.3
• 申請日: 2007-03-26
• 公開（公告）號: CN101121942A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發明（設計）人: 徐洪偉;周曉馥
• 申請（專利權）人: 吉林師范大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/87
• 代理公司: 四平市新時代專利事務所
• 代理人: 石岱

1.一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法，其特征在于：以發根農桿菌(Agrobacterium?rhizogenes)介導玉米遺傳轉化，具體是用發根農桿菌侵染玉米愈傷組織誘導產生毛狀根(hairyroot)，毛狀根經分化培養再生轉基因植株；以Ri質粒為載體，將一個或多個外源基因導入受體基因組中。

2.如權利要求1所述的一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法，其特征在于：該方法的步驟為：

a、Ri質粒的轉化載體構建，將外源基因導入T-DNA，中間載體采用pBI121，并帶有nos-pro，nos-ter(T-DNA限制性內切酶片斷)及npt-II基因；把外源基因插入T-DNA的35S啟動子和終止子之間構建中間載體；將中間載體導入發根農桿菌，通過誘導菌株的協助質粒E.coli?HB101(pRK?2013)、攜帶中間載體pBI121-外源基因的大腸桿菌和發根農桿菌直接進行三親雜交，再通過同源重組把中間載體整合到Ri質粒的T-DNA中，通過酶切和測序進行檢測；

b、將攜帶有中間載體pBI121的發根農桿菌振蕩培養當A₆₀₀為1.2時用于侵染玉米愈傷組織誘導毛狀根，將產生的毛狀根分化培養再生植株。

3.如權利要求1所述的一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法，其特征在于：所述的發根農桿菌菌系為ATCC15834或Ri1000或Ri1601或A₄。

4.如權利要求1所述的一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法，其特征在于：所述愈傷組織為所有玉米基因型的愈傷組織。

5.如權利要求4所述的一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法，其特征在于：所述的愈傷組織為具有胚性的II型愈傷組織。

6.如權利要求1所述的一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法，其特征在于：所述的發根農桿菌與愈傷組織共培養，在20～24℃條件下黑暗共培養1～3天。

7.如權利要求1或2所述的一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法，其特征在于：所述的發根農桿菌菌液A₆₀₀值為0.5～1.5。

8.如權利要求1或2所述的一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化新方法，其特征在于：在轉化的侵染和共培養過程中添加乙酰丁香酮，乙酰丁香酮濃度為30～150μmol/L。

9.如權利要求1或2所述的一種以發根農桿菌介導的玉米遺傳轉化方法在生產轉基因玉米及植株抗旱的應用。