[發明專利]一種豬肌內脂肪含量基因Lpin1的克隆及其應用

有效

• 申請號: 200710053255.4
• 申請日: 2007-09-18
• 公開（公告）號: CN101157922A
• 公開（公告）日: 2008-04-09
• 發明（設計）人: 劉榜;何小平;李奎;趙書紅;樊斌;余梅;朱猛進;彭中鎮;李長春;徐學文
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

1.一種豬肌內脂肪含量基因Lpin1，它的cDNA序列如序列表SEQ?ID?NO：1所述。

2.根據權利要求1所述的cDNA序列，其特征在于：所獲得的基因Lpin1序列長度為5559bp，序列中包含2685bp的開放閱讀框，111bp的5’非翻譯區和2763bp的3’非翻譯區。

3.一種豬肌內脂肪含量基因Lpin1，它的DNA序列如序列表SEQ?ID?NO：3所述。

4.根據權利要求3所述的DNA序列，其特征在于：序列表SEQ?ID?NO：3的第61bp處有一個C61-T61的堿基突變，導致Taq1-RFLP多態性。

5.根據權利要求3所述的DNA序列，其中檢測C61-T61堿基處突變的正、反向引物的DNA序列如下所示：

正向引物：5′GTTTGTCACCGTGAAGGA?3′，

反向引物：5′AAGCCACAGTAATCAGAACA?3′。

6.權利要求1-5所述的基因在豬分子標記輔助選擇中的應用。

7.一種篩選適用于豬肌內脂肪含量性狀的分子標記的方法，按照以下步驟：

第一步：

用人Lpin1基因cDNA為信息探針，作同源序列篩選，獲得相似性80％以上的EST；然后構建豬EST-重疊群，設計引物擴增cDNA片段，PCR產物純化、克隆和測序；設計3’RACE引物；提取豬肌肉組織總RNA并做cDNA第一鏈反轉錄；RACE的PCR擴增和RACE產物的純化、克隆和測序；通過序列分析獲得如序列表SEQ?ID?NO：1所述的cDNA序列；

第二步：

根據序列表SEQ?ID?NO：1所述的cDNA序列與人Lpin1的基因組全長DNA序列的比對結果大致得出外顯子的拼接位點，并根據豬Lpin1基因cDNA篩選豬DNA序列，設計引物進行PCR擴增，PCR產物純化、克隆和測序，獲得如序列表SEQ?ID?NO：3所述的DNA序列。