[發明專利]一種從石蒜屬植物中提取活性生物堿的方法

無效

• 申請號: 200710053207.5
• 申請日: 2007-09-13
• 公開（公告）號: CN101157947A
• 公開（公告）日: 2008-04-09
• 發明（設計）人: 敖明章;余龍江;廖娜;崔永明;江喜敏;張明
• 申請（專利權）人: 華中科技大學;恩施市錦華生物工程有限責任公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18
• 代理公司: 華中科技大學專利中心
• 代理人: 曹葆青

技術領域

本發明屬于天然有機化學領域，涉及一種從石蒜屬植物中提取活性生物堿的方法。

背景技術

石蒜屬(Lycoris?Herb.)植物是石蒜科(Amaryllidaceae)中的一個重要屬，為多年生草本植物。據不完全統計，其在全世界約有20多種，主要分布于東亞的暖溫帶至亞熱帶。石蒜中含有大量生物堿。國外科學家在20世紀初就提取分離出大量生物堿。如Lycorine(石蒜堿)，tazettine(多花水仙堿)，homolycorine(高石蒜堿)，加可拉敏(lycoramine)，石蒜倫堿(lycorenine)，偽石蒜堿(pseudlycorine)，去甲普魯維因(norpluviine)，表加蘭加敏(epigalanthamine)，維他廷(vittatine)，普魯維因(pluviine)，小星蒜堿(hippeastrine)等生物堿。

我國科技相對落后，到了20世紀50年代才開展石蒜生物堿的研究，也取得了一定成果。如洪山海、馬廣恩等對我國石蒜也進行了植物化學及藥理方面的研究，并從中分離出新的化合物紫花石蒜堿(squamigerine)。

現代藥理研究和臨床表明，石蒜生物堿具有多種生物活性和療效：加蘭他敏是治療老年期癡呆癥、小兒麻痹后遺癥及重癥肌無力的特效藥，對癡呆患者和腦器質性病變引起的記憶障礙亦有改善作用；石蒜堿具有抗阿米巴原蟲、抗癌、降壓、催吐、祛痰、解痙，比嗎啡強5倍的鎮痛作用、比阿司匹林也有更強的鎮痛作用。其衍生物石蒜堿內銨鹽用于治療消化道癌、肝癌、卵巢癌、肺癌、頭頸部癌、惡性淋巴瘤等，其中對胃癌、卵巢癌療效較好；力可拉敏用于脊髓灰質炎后遺癥性癱瘓，腦血管意外所致的偏癱，坐骨神經炎；多花水仙堿具有擬膽堿樣作用，對吉田肉瘤的生長具有很好抑制作用。

目前，現有技術中以石蒜為原料，經過煩瑣的提取分離純化步驟，只生產一種石蒜生物堿單體產品而廢棄富含其它寶貴活性成分的生物堿，沒有充分利用石蒜資源，并且生產周期長、產率收率不高、產品遠沒有達到藥用級的高純度要求。中國專利文獻“一種石蒜氫溴酸加蘭他敏酸水浸提生物堿提取方法及工藝”(公開號CN1569856，公開日為2005.01.26)中大量使用酸提取，生產過程中使用大量酸堿，排放大量廢酸廢堿，嚴重污染環境，不利于產業化；“從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法”(公開號CN1490319，公開日為2004.04.21)中的工藝中大量使用有機溶劑，生產安全系數低，成本高，工業化生產受到限制；中國專利文獻“從石蒜或雪花蓮屬原料中提取加蘭他敏的方法”(公開號CN1696131，公開日為2005.11.16)中所用儀器價格昂貴、處理量小、需要高級技術人員才能操作，不適宜放大生產，產業化受到限制；并且大多數工藝都只得到單一產品，造成資源浪費。如“從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法”、“從石蒜粗提物中分離高純度加蘭他敏的方法”、“一種石蒜氫溴酸加蘭他敏樹脂吸附除雜方法及工藝”和“從石蒜屬植物中提取力可拉敏的工藝方法”等專利文獻。

總之，現有以石蒜為原料生產生物堿的方法存在以下不足：產品單一、步驟煩瑣、周期長、產品收得率不高、安全系數低、成本高、石蒜資源利用率不高和環境污染嚴重，以及不易產業化。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從石蒜屬植物中提取活性生物堿的方法，該方法產品收得率高，可以同時得到多種產品，并且環境污染低。

本發明提供的從石蒜屬植物中提取活性生物堿的方法，其步驟包括：

(1)在切碎后的石蒜屬植物中加入體積為2～10倍量的水，再加入復合纖維素酶，復合纖維素酶與石蒜屬植物的質量百分比為0.1～0.5％，調節pH值至5～8，在溫度20～60℃下酶解2～24小時，再將酶解后石蒜屬植物細胞破碎，過濾，得到提取液；

(2)濃縮上述提取液，得到提取物濃縮液，該濃縮液的比重在20℃測量時為1.05～1.15；

(3)按pH值分步對上述提取物濃縮液進行萃取；

(4)將萃取各步得到的產物以粗產品比填料為1∶60～1∶5的量分別進行柱層析，再進行洗脫；

(5)將柱層析分離得到的相同組分合并，反復重結晶，得到多種高純度單體。

本發明方法對上述技術方案進行了下述優化，

步驟(1)中復合纖維素酶的組分及質量比為：纖維素酶40-50％，果膠酶30-40％、半纖維素酶20-30％。

步驟(3)按下述過程進行萃取：