[發明專利]發酵生產低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法

無效

• 申請號: 200710053164.0
• 申請日: 2007-09-07
• 公開（公告）號: CN101153298A
• 公開（公告）日: 2008-04-02
• 發明（設計）人: 魯偉;岳傳靜;岳傳軍;吳志偉
• 申請（專利權）人: 武漢麥可得生物技術有限公司
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司
• 代理人: 唐萬榮

1.發酵生產低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，其特征在于它包括如下步驟：

1)、菌種活化：

制備活化培養基：200g馬鈴薯，水1000ml，10-20g葡萄糖，17-20g瓊脂，5-10g氮源；

所述的氮源為酵母膏、酵母粉、花生粉、牛肉膏、蛋白胨、魚粉、硝酸鉀或硝酸鈉；

將深黃被孢霉(Mortierella?isabellina)在活化培養基斜面進行菌種活化培養，25-28℃，培養箱濕度40-50％，培養3-4天，得活化菌種，備用；

2)搖瓶菌種制備：

將活化培養基上的活化菌種用無菌水振蕩洗脫后接入種子培養基搖瓶中，種子培養基搖瓶中有搖瓶培養基；搖瓶培養基配方為：18-20g/L葡萄糖，10-15g/L酵母膏；通入壓縮空氣，通氣量為0.4-0.6VVM，搖床轉速為100-250rpm，培養溫度為20-30℃，振蕩培養3-5天；從培養箱中取出后置于4-10℃條件下保持60-120min，得搖瓶菌種，備用；

3)發酵：

將制得的搖瓶菌種接種于有發酵培養基的搖瓶或發酵罐中進行發酵培養，接種量為搖瓶菌種所占發酵培養基體積的8-20％，發酵培養基配方為：碳源10-30g/L，氮源10-21g/L；用1-5mol/L的酸或堿調節pH至5.5-7；通入潔凈壓縮空氣，通氣量為0.4-0.6VVM；轉速100-200rpm，壓力0.01-0.05Mpa，溫度20-30℃，期間每隔24h補充10g/L的碳源，每48h補充1g/L的硝酸鈉，發酵培養7-9天，收獲菌體，從菌體中回收提取低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂。

2.根據權利要求1所述的發酵生產低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，其特征在于：發酵培養基中的碳源為葡萄糖、果糖、淀粉水解糖、乳糖、糊精、蔗糖、玉米糖漿中的任意一種或任意二種以上的混合物，任意二種以上混合時為任意配比；發酵培養基中的氮源為酵母膏、酵母粉、花生粉、牛肉膏、蛋白胨、魚粉、硝酸鉀、硝酸鈉中的任意一種或任意二種以上的混合物，任意二種以上混合時為任意配比。

3.根據權利要求1所述的發酵生產低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，其特征在于：發酵培養基的配方為：葡萄糖10-30g/L，酵母膏10-20g/L，硝酸鈉1g/L。

4.根據權利要求1所述的發酵生產低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，其特征在于：從菌體中回收提取目低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法包括：a、干法以抽真空加熱脫水的方式烘干菌體，經粉碎后以有機溶劑萃取制得毛油，并經精煉后制得低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂；b、濕法以濕的菌體直接破壁后有機溶劑萃取制得毛油，并經精煉后制得低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂。

5.根據權利要求4所述的發酵生產低神經酸、EPA含量的花生四烯酸油脂的方法，其特征在于：有機溶劑為正己烷或丁烷。