[發明專利]表達腸毒素大腸桿菌黏附素基因的重組菌及其在卵黃抗體飼料中的應用

有效

• 申請號: 200710052615.9
• 申請日: 2007-07-02
• 公開（公告）號: CN101113428A
• 公開（公告）日: 2008-01-30
• 發明（設計）人: 彭健;王劼;蔣思文
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/62;A23K1/16
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明動物營養學與飼料科學技術領域，同時涉及動物分子生物學的應用。具體地，本發明涉及一種表達豬腸毒素大腸桿菌K88和F18黏附素基因faeG和fedF的重組菌及其在制備卵黃抗體飼料中的應用。

背景技術

在規模化養豬生產中，腸毒素大腸桿菌(簡稱ETEC)是引起新生仔豬和斷奶仔豬腹瀉主要的致病因素。K88是引起斷奶仔豬腹瀉ETEC中最主要的一種菌毛基因型(Osek?J等.Rapid?and?specificdifferentiation?of?enterotoxin-producing?Escherichia?coli?strains?from?other?gram-negative?enteric?bacteriausing?multiplex?PCR.Berl?Munch?Tierarztl?Wochenschr，2000，113：265-70)；其中以K88ac亞型最為常見。在丹麥，Ojeniyi等(Ojeniyi?B等.Detection?of?fimbrial?and?toxin?genes?in?and?their?prevalence?inpiglets?with?diarrhea.The?applfication?of?colony?hybridization?assay，polymerase?chain?reaction?andphenotype?assays.J?Vet?Med?B，1994，41：49-59)；在德國，Wittig等(Wittig?W等.Prevalence?of?thefimbrial?antigens?F18?and?K88?and?of?enterotoxins?and?verotoxins?among?Escherichia?coli?isolated?fromweaned?pigs.Zentralbl?Bakteriol，1995，283：95-104)；國內的成大榮(成大榮.斷奶仔豬源人腸桿菌毒力因子的分子流行病學及F18菌毛部分特性的研究.[博士學位論文].揚州：揚州大學圖書館，2005)的調查表明，F18是引起斷奶仔豬水腫病和腹瀉的另一主要的致病性大腸桿菌，與致斷奶仔豬腹瀉ETEC相關的2134P、8813、8199等大多屬于F18ac(Wittig?W等.Expression?and?plasmid?transfer?ofgenes?coding?for?the?fimbrial?antigen?F107?in?porcine?Escherichia?coli?strains.Zentralbl?Bakteriol，1994，281：130-139)。

用提純的K88或F18菌毛免疫母雞，制備針對ETEC?K88或F18的卵黃抗體，體外可以阻斷K88或F18菌株對仔豬腸細胞的黏附，添加于飼料中，可以有效降低仔豬腹瀉率，并在一定程度上改善仔豬的生長性能(Yokoyama?H等.Passive?protective?effect?of?chicken?egg?yolk?immunoglobulinsagainst?experimental?enterotoxigenic?Escherichia?coli?infection?in?neonatal?piglets.Infect?Immun，1992，60：998-1007；Imberechts?H等.Chicken?egg?yolk?antibodies?against?F18ab?Fimbriae?of?Escherichiu?coliinhibit?shedding?of?F18?Positive?E.coli?by?experimentally?infected?pigs.Vet?Micro，1997，54：329-341；Marquardt?R?R等.Passive?protective?effect?of?egg-yolk?antibodies?against?enterotoxigenic?Escherichiucoli?K88⁺?infection?in?neonatal?and?early-weaned?piglets.FEMS?Immunol?Med?Microbiol，1999，23：283-288)。然而，上述資料中主要采用直接從ETEC菌株中分離提純的方法制備菌毛蛋白抗原，由于一般ETEC的菌毛表達量十分有限，而且一些菌毛體外表達微弱甚至不表達，因而由分離提純的方法獲得的菌毛抗原量少，成本高，不適用于卵黃抗體的規模化生產。