[發明專利]堿溶性香菇多糖提取、分離、純化及分子量的測定

有效

• 申請號: 200710051644.3
• 申請日: 2007-03-09
• 公開（公告）號: CN101261203A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發明（設計）人: 金文準;王務鼎;王衛健;周曉海;胡榮大
• 申請（專利權）人: 金文準;王務鼎;王衛健;周曉海;胡榮大
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N30/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明是對現有香菇多糖提取工藝的改進，公開了堿溶性香菇多糖提取、分離、純化新工藝及分子量測定的新方法。以香菇子實體為原料進行提取、分離、純化、涉及天然生物反應調節劑的制備及其檢測方法。

背景技術

香菇中富含蛋白質、雜多糖和香菇多糖等多種成分，是我國傳統的中藥材，具有補肝益氣的作用。香菇多糖(英文名Lentinan)，其一級結構是β-(1-3)葡萄糖為主鏈，β-(1-6)葡萄糖為側鏈的葡聚糖，是一種免疫調節型抗腫瘤輔助藥物。1965年日本千原吳郎發現其有抗腫瘤活性后，各國科學家就對香菇多糖進行廣泛研究，發現香菇多糖不但治療多種免疫缺乏疾病，如慢性病毒性肝炎和由病毒引起的慢性疾病，還能對多種腫瘤有較強的抑制和治療作用。1985年日本首先開發成功注射用香菇多糖作為抗腫瘤新藥上市。我國1988年開始進口日本味之素的香菇多糖，并用于臨床。

香菇多糖提取工藝十分復雜，香菇除含有多糖物質外，還含有一定量蛋白質、膠質、粗纖維及脂肪等成分。目前常采用的方法是沸水浸提乙醇析出的方法，而這樣提取多糖的純度并不高，仍需經過一系列后續處理才能使多糖含量達到90％左右。此提取步驟不僅耗費了大量的乙醇。而且得到的香菇多糖含量并不高，造成后續工藝處理復雜。有關香菇多糖的分子量測定，目前我國均采用GPC凝膠色譜(示差儀)測定。由于所采用的凝膠柱型號各不相同，對分子量的測定誤差很大，無法準確判斷香菇多糖原料是否合格。為了使香菇多糖原料分子量測定更準確，我們用GPC凝膠色譜儀激光光散射的方法來測定香菇多糖的分子量，該方法是通過香菇多糖粒徑來判斷分子量的大小，再計算出重均分子量。具有測定分子量簡便、準確率高、無需對照品，即可測出香菇多糖樣品的準確分子量。

發明內容

本發明目的就是為了尋找一種新的較為易于生產、成本低、目標明確、檢測方便、可行的堿溶性香菇多糖的提取、分離、純化新工藝及其分子量測定方法。

香菇多糖提取、分離、純化具體過程通過下列步驟實施：

干香菇→粉碎→堿提3次(40-50℃)→濃縮→堿洗→水洗→級分→低溫干燥→粗品溶解→離心→上清液上DEAE纖維素純化→離子交換樹脂柱吸附→過濾→超濾膜濃縮→測分子量→透析→透析物冷凍干燥

操作工藝：

1.取干香菇子實體粉碎后，加8-10倍，0.3-1mol/LNaoH溶液、溫控30-50℃攪拌提取3次。每次3-4小時。合并提取液，濾去不溶物、濃縮至原液體積8-10分之一。用0.3mol/LNaOH濃縮液洗滌2次再用同樣體積去離子水洗滌2次濃縮液，用茚三酮檢測，基本無殘余蛋白質，將洗滌后的濃縮液在快速攪拌下加不同含量的乙醇進行級分，將級分粘稠物低溫干燥，得粗品，將粗品溶解后離心，取上層清液上DEAE纖維素柱除雜純化，用0.15mol/LNaoH洗脫，合并洗脫液，上離子交換樹脂柱吸附脫色，合并洗脫液，過濾，按設定分子量膜包分別超濾濃縮，用GPC激光光散射凝膠色譜儀測定分子量，按分子量范圍，分別透析、凍干得各組份堿溶性香菇多糖。經檢測分子量為40-80萬Da的堿溶性香菇多糖其外觀、吸濕性、溶解度、比旋度、熔點、特性粘度、酸堿度、干燥失重、分子量及分子量分布、純度、含量、紅外吸收光譜(見圖1、圖2)均與國家標準WS₁-(X-032)-2004Z香菇多糖的規定一致。

提取、分離、純化香菇多糖具體實施方式

實施例1：

取合格的干香菇原料8公斤，粉碎后，置于帶夾套的反應鍋中。加入0.5mol/LNaoH的堿溶液80公斤加熱至40℃，保溫攪拌4小時，過濾，殘渣再用上述方法提取2次。合并全部溶液，濃縮至原體積的十分之一，再加入0.3mol/L?NaOH?2倍于濃縮液的堿液濃縮洗滌2次，再用同樣體積去離子水濃縮洗滌2次，洗滌后的濃縮液用茚三酮檢測反應不顯藍紫色。將洗滌后的濃縮液在快速攪拌下用50-70％的乙醇進行級分，繼續攪拌15分鐘后靜置4小時，沉淀產生、傾去上清液，沉淀物再用80-90％的酒精溶解攪拌15分鐘后靜置4小時，沉淀產生，沉淀物在50℃低溫干燥得無蛋白殘留堿溶性香菇多糖粗品400克。