[發(fā)明專(zhuān)利]一種抗腫瘤生物活性物質(zhì)及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710050476.6
• 申請(qǐng)日: 2007-11-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101177674A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳敬波
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/08
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/08
• 代理公司: 內(nèi)江市三正專(zhuān)利事務(wù)所
• 代理人: 魏常巍

1.一種抗腫瘤生物活性物質(zhì)，其特征在于，其為心肌細(xì)胞培養(yǎng)液，所述心肌細(xì)胞培養(yǎng)液由心臟組織經(jīng)以下步驟獲得：

1)制細(xì)胞懸液：將心臟組織制成細(xì)胞懸液；

2)計(jì)數(shù)、接種：取細(xì)胞懸液以2×10⁵/ml接種在50cm²的培養(yǎng)瓶中，在37℃、5％濃度的CO₂孵箱中孵育90分鐘；

3)純化：輕輕振搖后吸出尚未貼壁的心肌細(xì)胞，以1×10⁵ml接種在50cm²的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)放入37℃、5％濃度的CO₂孵箱中孵育48小時(shí)；

4)收集：待心肌細(xì)胞長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期后更換新鮮培養(yǎng)液20ml，繼續(xù)孵育24小時(shí)后取培養(yǎng)液，經(jīng)過(guò)超濾離心后收集分子量小于10KD的濾液即為心肌細(xì)胞培養(yǎng)液。

2.一種抗腫瘤生物活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于由以下步驟獲得：

1)制細(xì)胞懸液：將心臟碎塊移入玻璃試管中，加入預(yù)溫37℃的濃度為0.25％胰酶和0.1％的膠原酶各5ml，放入37℃水浴箱中消化20分鐘，第一次培養(yǎng)液棄去，重復(fù)消化3次，收集每次消化后靜置培養(yǎng)液，在1000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心10分鐘，再用D-hanks液洗滌細(xì)胞兩次，然后用完全培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液；

2)計(jì)數(shù)、接種：取細(xì)胞懸液以2×10⁵/ml接種在50cm²的培養(yǎng)瓶中，在37℃、5％濃度的CO₂孵箱中孵育90分鐘；

3)純化：輕輕振搖后吸出尚未貼壁的心肌細(xì)胞，以1×10⁵ml接種在50cm²的培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)放入37℃、5％濃度的CO₂孵箱中孵育48小時(shí)；

4)收集：待心肌細(xì)胞長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期后更換新鮮培養(yǎng)液20ml，繼續(xù)孵育24小時(shí)后取培養(yǎng)液，經(jīng)過(guò)超濾離心后收集分子量小于10KD的濾液即為心肌細(xì)胞培養(yǎng)液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗腫瘤生物活性物質(zhì)的制備方法，其特征在于完全培養(yǎng)基是含20％小牛血清和雙抗的液體。