[發(fā)明專利]一種高純度羅漢果甜甙V的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710050255.9
• 申請日: 2007-10-10
• 公開（公告）號: CN101407535A
• 公開（公告）日: 2009-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫莉莉;韋海洪;唐江明;李振志
• 申請（專利權(quán)）人: 桂林市振達(dá)生物科技有限責(zé)任公司
• 主分類號: C07J17/00
• 分類號: C07J17/00
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 馬 蘭

(一)技術(shù)領(lǐng)域????

本發(fā)明涉及從天然植物中提取有效成分的方法，特別是一種高純度羅漢果甜甙V的制備方法。

(二)背景技術(shù)：

羅漢果，屬葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物的果實，是我國南方特有植物，主要產(chǎn)于桂北地區(qū)，以廣西桂林地區(qū)的羅漢果品質(zhì)最好。羅漢果長期作為中藥和飲料干果而食用，其味極甜、性涼、無毒、入脾肺，具有清肺止咳、潤腸通便、清熱解毒、祛痰補(bǔ)血、益肝、健脾、鎮(zhèn)靜、止渴、促進(jìn)腸胃機(jī)能、抑制哮喘以及降壓等功效。自從1?97?5年首先報告羅漢果果實中含有二萜甜味甙以來，已經(jīng)從羅漢果果實中分離并鑒定出了羅漢果甙IV(mogroside?IV)、羅漢果甙V、羅漢果甙III、羅漢果甙IIE、羅漢果甙IIIE、羅漢果甙VI、羅漢果甙A、羅漢果新甙(nemogroside)、賽門甙I(siamensideI)、11-oxo-mogroside、羅漢果二醇苯甲酸酯(mogroester)共11種葫蘆烷三萜甙類(cucurbitaneglvcosides)化合物，該類化合物是羅漢果果實中的主要活性物質(zhì)，約占干果重4％，除少數(shù)為無甜(如羅漢果甙IV)或苦味(如羅漢果新甙)物質(zhì)外，大多為甜味成分或微甜物質(zhì)，其中羅漢果甙V為三萜系糖甙類S-5的強(qiáng)甜物質(zhì)，是羅漢果果實中含量和甜度均較高的成分，是主要的甜味成分，其甜度相當(dāng)于蔗糖的300倍。羅漢果甜甙味甜而純正，無異味，回味感強(qiáng)，熱穩(wěn)定性好，可作為食品、菜肴的甜味劑，是糖尿病人理想的食糖代用品。

現(xiàn)有普遍使用的羅漢果甜甙提取方法，但所得的提取物中，羅漢果甜甙V的純度均較低，大多不超過80％，為此，申請?zhí)枮椋?00510071877.0，名稱為《高純度羅漢果甜苷V的制備方法和用途》，公開了一種高純度羅漢果甜苷的制備方法，其步驟如下：先將羅漢果粉碎，用乙醇加熱回流提取，再將提取物用D101型大孔樹脂柱分離，先去離子水和乙醇分別洗脫至無色，再收集其洗脫液，減壓濃縮至浸膏狀，然后用正相硅膠柱分離，加入氯仿、甲醇、水為洗脫劑，收集洗脫液，減壓濃縮，再用反相硅膠C-18柱分離，并對所收集的每一份洗脫液利用HPLC檢測，合并保留時間相同而且純度在90％～98％之間和98％以上的羅漢果甜苷V組分，減壓濃縮，即可分別得到純度在90％～98％之間的羅漢果甜苷V和純度大于98％的羅漢果甜苷V組分。又如，申請?zhí)枮椋?00710039130.6，名稱為《從羅漢果中制備高純度羅漢果苷V的方法》，也公開了一種從羅漢果中制備高純度羅漢果苷V的方法，該方法步驟為：(1)先將羅漢果粉碎成粗粉，加入乙醇回流提取，濾過，得醇浸膏；(2)將醇浸膏懸浮于水，用乙酸乙酯萃取1次-3次，回收乙酸乙酯母液；(3)繼用正丁醇萃取1次-3次母液，回收正丁醇得正丁醇浸膏；(4)將正丁醇浸膏通過聚酰胺柱，水洗液濃縮得粗皂苷；(5)粗皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，氯仿-甲醇-水洗脫，收集得羅漢果苷v粗品；(6)取羅漢果苷v粗品進(jìn)行C18反相硅膠柱層析，水洗，乙醇洗脫，收集純度大于95％以上的羅漢果苷V。雖然上述制備方法均可以獲得純度大于90％的羅漢果甜甙V，但均需通過正相硅膠柱和反相硅膠柱兩次過柱層析，其工序較多，操作復(fù)雜，成本也相應(yīng)較高，而且采用水與其它有機(jī)溶劑混合的洗脫劑，會將雜質(zhì)一同洗脫出來，從而影響到成品的純度。

(三)發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明將公開工藝簡單、成本低廉、收率高的高純度羅漢果甜甙V的制備方法。

本發(fā)明高純度羅漢果甜甙V的制備方法，其步驟如下：

1)取羅漢果甜甙溶于甲醇中，過濾，得濾液；其中，所述的羅漢果甜甙可選用現(xiàn)有任意方法制備的羅漢果甜甙；而甲醇的用量以能溶解羅漢果甜甙為準(zhǔn)，一般來說，羅漢果甜甙與甲醇之間的配比，按羅漢果甜甙的重量∶甲醇的體積＝1∶5～10較為合適；

2)在所得濾液中加入丙酮使其產(chǎn)生沉淀，過濾，得沉淀物；最好在濾液中加入等體積量的丙酮；

3)取沉淀物用正相硅膠柱進(jìn)行吸附；所用硅膠的重量一般為上樣量的30～100倍；

4)吸附好的正相硅膠柱，用低碳鏈酯與乙醇的混合溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；一般來說，低碳鏈酯與乙醇的體積比＝2～7∶1；洗脫時，洗脫劑的流速一般在2～5ml/min較為適合；所述低碳鏈酯最好選用乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯或乙酸異戊酯等；