[發(fā)明專利]一種從黨參藥材中快速分離純化黨參炔苷單體的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710050227.7
• 申請日: 2007-10-12
• 公開（公告）號: CN101177440A
• 公開（公告）日: 2008-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊兵;張黎;董維珍;劉丁
• 申請（專利權(quán)）人: 成都普思生物科技有限公司
• 主分類號: C07H15/203
• 分類號: C07H15/203;C07H1/08
• 代理公司: 成都市輔君專利代理有限公司
• 代理人: 楊海燕

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及能工業(yè)化地從藥材黨參中快速分離純化黨參炔苷單體的工藝方法。

背景技術(shù)

桔?？浦参稂h參Codonopsis?pilosula(Franch.)Nannf.、素花黨參Codonopsis?pilosula?Nannf.var.modesta(Nannf.)L.T.Shen或川黨參Codonopsistangshen?Oliv.的干燥根為歷版藥典收載品種。因產(chǎn)地、種類不同而有多種商品，比如潞黨參、臺黨參、東黨參及文黨參等，都具有補(bǔ)中益氣，健脾益肺等功效，他們都共同含有其活性成分黨參炔苷，2005版藥典已經(jīng)由黨參多糖作為特征成分改為采用黨參炔苷作為薄層鑒定的特征成分，為了更好地控制黨參的內(nèi)在質(zhì)量，對黨參炔苷的需求將會越來越大，而目前市場上僅有少數(shù)幾家提供毫克級量的廠家。目前文獻(xiàn)報道的黨參炔苷的含量很低，為萬分之三到千分之一，且黨參炔苷不穩(wěn)定，見光受熱易分解。目前文獻(xiàn)報道(賀慶等人)的黨參炔苷的方法為：分部位萃取后反復(fù)柱層析，包括硅膠柱層析和葡聚糖層析等，此方法耗時長，溶劑消耗大，回收溶劑繁瑣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供能中藥材黨參中工業(yè)化地、快速地、低成本地分離高純度黨參炔苷單體的方法。

完成本發(fā)明的任務(wù)包括如下步驟：

一種從藥材黨參中快速分離純化黨參炔苷單體的方法，在25℃--58℃條件下，最好是在55℃條件下進(jìn)行以下步驟：

A.冷浸提取：用黨參干燥塊根粉與乙醇或甲醇混合浸泡24小時-36小時，冷浸過濾除渣，所得液體用減壓回收除去乙醇或甲醇獲得濃浸膏；混合比例是黨參體積與乙醇或甲醇體積比為1∶3；乙醇濃度為95％--100％，甲醇濃度為100％。

B.樹脂粗分：用水稀釋上步所得濃浸膏作為樣品，在大孔樹脂上樣之前，用200目左右的細(xì)紗布過濾，以除去沙塵等固體雜質(zhì)，再上樣到經(jīng)過活化處理的大孔吸附樹脂柱，用50％--70％乙醇洗脫大孔吸附樹脂，將乙醇洗脫液減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇；大孔吸附樹選用D131或者D101大孔吸附樹脂，可用安徽三星樹脂有限公司提供的D131或者D101大孔吸附樹脂。洗脫分三步：第一步用水洗至幾乎沒有顏色，除去大部分多糖等大極性雜質(zhì)，第二步用兩個柱體積的(2BV)30％乙醇洗脫，進(jìn)一步除去雜質(zhì)而使黨參炔苷保留在樹脂上，第三步用50％--70％乙醇洗脫，黨參炔苷主要集中在50％--70％乙醇洗脫液中，得到黨參炔苷粗品，純度為60％左右，見圖1。這種三步法洗脫使其能保證大部分極性比黨參炔苷大的雜質(zhì)被除去，大大提高了提取物中的黨參炔苷的含量，這是本發(fā)明的要點之一。

C.色譜分離：用丙酮溶解C18(十八烷基鍵合硅膠，購自日本Fuji公司)填料攪拌均勻使其成勻漿狀后，采用動態(tài)軸向壓縮法裝柱，柱規(guī)格為25cm*5cm--25cm*30cm。將黨參炔苷粗品用乙腈-水的流動相稀釋后進(jìn)樣，一次制備色譜分離循環(huán)大約持續(xù)30min，分段收集流出液即流分，用分析型高效液相色譜儀對各餾分進(jìn)行純度檢測，純度為98％以上的流分為本步驟的合格品，純度低于95％的流分重復(fù)上述步驟，純度98％以上的流分回收產(chǎn)品后，得到黃色油狀物，然后進(jìn)入下一個步驟。

本步驟中，乙腈-水的流動相中乙腈占水的體積比例為15％-30％，高壓輸液泵和UV(紫外-可見光)檢測器由北京創(chuàng)新通恒科技有限公司和成都普思生物科技有限公司聯(lián)合提供。檢測波長為267nm，流速為250ml/min，進(jìn)樣量為50ml，色譜柱為成都普思生物科技有限公司自主研制，C18反相填料裝柱，C18粒徑為10μm-25μm，孔徑為100A。

本步驟的樣品回收方法：由于流動相中含大量水，在55℃的溫度下很難濃縮除去水。所以濃縮過程采取減壓回收乙腈后，用D101大孔吸附樹脂富集，用95％的乙醇洗脫，減壓回收乙醇的方法，可以快速地，且保證黨參炔苷不會因為溫度過高和長久受熱而分解。制備分離的在線監(jiān)測圖譜見圖2。

D.脫色純化：將純度達(dá)98％以上的黃色油狀黨參炔苷浸膏加入聚酰胺樹脂后，用水洗脫聚酰胺樹脂得水洗脫液；為回收產(chǎn)品，將水洗脫液加入大孔吸附樹脂，再用95％的乙醇洗脫大孔吸附樹脂上的黨參炔苷，減壓回收除去乙醇，最后得到純度高達(dá)98.5％以上的黨參炔苷產(chǎn)品。聚酰胺樹脂可選上海摩速科學(xué)器材有限公司的120目的聚酰胺樹脂。見圖3。

圖1是D101大孔吸附樹脂粗分后的HPLC圖譜；

圖2是制備型液相色譜分離黨參炔苷的在線監(jiān)測圖譜；

圖3是黨參炔苷純品的HPLC圖譜。

本發(fā)明的優(yōu)點：