[發明專利]依博素的制備方法

無效

• 申請號: 200710049093.7
• 申請日: 2007-05-14
• 公開（公告）號: CN101307345A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發明（設計）人: 李元;吳劍波;姜蓉;郭連宏;張洋;李寶義;石蓮英;董兆勇;趙斌;彭紅衛;楊偉;王建洲;張寶華;曾裕建;陳春會
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫藥生物技術研究所;四川恒星生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12N1/20;A61P19/02;A61P19/04;A61P29/00;C12R1/465
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1、依博素的制備方法，它包括菌種培養和多糖分離分化兩個步驟：其中，菌種培養的具體步驟為：將于-70℃冷凍保存的菌種唐得鏈霉菌(Streptomyces?tendae)接種于斜面26℃-37℃培養復壯，將培養復壯的種子斜面挖塊接種至搖瓶26℃-37℃培養36-60小時，一級種子液接種于種子罐，于26℃-37℃培養36-60小時的二級種子液接種于發酵罐，于26℃-37℃培養80-160小時；

多糖分離分化的具體步驟為：板框過濾，大孔吸附樹脂柱層析，陽離子交換樹脂柱層析，超濾，沉淀，離心，得依博素濕沉淀物，再將依博素濕沉淀物過凝膠柱層析，洗脫液，超濾，噴霧干燥，得純品依博素。

2、根據權利要求1所述的依博素的制備方法，其特征在于：菌種培養中，斜面培樣基(％)：葡萄糖1，天門冬素0.5，K₂HPO₄?0.05，瓊脂2，自然pH，10磅消毒30分鐘；種子培樣基(％)：葡萄糖1，淀粉2，黃豆餅粉(熱榨)2，胰蛋白胨0.2，牛肉膏0.2，酵母粉0.4，K₂HPO₄0.05，CaCO₃0.3，自然pH，121℃，15磅消毒30分鐘；發酵培養基(％)：葡萄糖1.5，淀粉2.5，黃豆餅粉(熱榨)2，胰蛋白胨0.2，牛肉膏0.2，酵母粉0.4，K₂HPO₄0.05，CaCO₃?0.3，自然pH；121℃，15磅消毒30分鐘。

3、根據權利要求1或2所述的依博素的制備方法，其特征在于：菌種培養的具體步驟為：將于-70℃冷凍保存的菌種接種斜面26℃-37℃培養5-10天，經1-3代復壯的種子斜面挖塊接種至500ml三角瓶，在溫度為26℃-37℃、轉速為160-250rpm條件下旋轉培養一級種子液，將培養36-60小時的一級種子液接種于200L種子罐，于26℃-37℃、攪拌速度160-250rpm條件下攪拌通氣培養二級種子液，將培養36-60小時的二級種子液接種于5噸發酵罐，發酵罐溫度26℃-37℃、攪拌速度160-250rpm、空氣流量消后3-9m³/min、罐壓0.01-0.09Mpa條件下攪拌通氣培養80-160小時。

4、根據權利要求1所述的依博素的制備方法，其特征在于：多糖分離分化的具體步驟中板框過濾中：可在發酵液中加入3％(g/ml)助濾粉。

5、根據權利要求1所述的依博素的制備方法，其特征在于：多糖分離分化的具體步驟中大孔吸附樹脂柱層析，樹脂用量為濾液體積的5-7％。

6、根據權利要求1所述的依博素的制備方法，其特征在于：多糖分離分化的具體步驟中陽離子交換樹脂柱層析樹脂用量為樣品液體積的5-7％。

7、根據權利要求1所述的依博素的制備方法，其特征在于：多糖分離分化的具體步驟中沉淀方法為：加入4倍體積(v/v)的95％工業酒精沉淀，沉淀液靜置，取沉淀液。以上。

8、根據權利要求1所述的依博素的制備方法，其特征在于：多糖分離分化的具體步驟中超濾用截留分子量為8萬的濾膜超濾器超濾離子為止，可濃縮洗脫液5倍以上。